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摘要：目的 建立用GC法测定丁香罗勒油中丁香酚的含量。方法 OV-1弹性石英毛细管色谱柱（30m×0.32mm×0.25μm）为固定相，FID检测器，进样口温度230℃， 检测器温度250℃， 采用程序升温，柱温100℃， 保持1min，然后以15℃/min的速率升至220℃保持8min； 载气为氮气，以正十八烷为内标，按内标法计算丁香酚含量。结果 丁香酚进样量在0.5～4.5 mg /ml 范围内其峰面积与进样量呈良好线性关系。y=0.1311x-0.054，（r=0.9994）；加样回收率为100.96%，RSD为0.74%（n=9）。结论 该方法灵敏、简便，结果准确可靠，可作为控制丁香罗勒油质量的方法。
关键词：GC法；丁香罗勒油；丁香酚
丁香罗勒油为唇形科植物丁香罗勒Ocimum gratissimum L. 的全草经水蒸气蒸馏提取的挥发油[1]。
参照《中国药典》2010年版一部丁香罗勒油标准，考虑到生产和检验实际，我们在方法中使用了毛细管柱，测定法为内标法。丁香罗勒油中成分复杂，成分有三十多种以上[2]，使用了毛细管柱相对填充柱更能有效分离丁香酚，更具专属性，有效缩短了检验时间。
经实验证明该毛细管柱内标法的峰分离度、理论塔板数都符合《中国药典》2010年版要求，且优于（药典）填充柱法，本毛细管柱内标法的准确度、重复性、精密度、线性均符合要求；两方法相比：采用毛细管柱方法提高了准确度和工作效率，分析时间短、专属性强、色谱峰形良好。
1 仪器与材料
Agilent GC1790F 气相色谱仪，氢离子火焰检测器（FID）；sartorius BP211D电子天平，丁香酚对照品批号：110725-200610，购于中国药品生物制品检定所；正己烷为分析纯（广州市化学试剂厂），正十八烷内标物[东京化成工业株式会社（TCI）]，丁香罗勒油（佛山市南海中南药化厂提供，批号：060701、060702、060703）。
2 方法与结果
2.1 色谱条件与系统适用性
气相色谱条件：30m×0.32mm×0.25μm OV-1石英毛细管柱；程序升温：起始温度100℃，保持1min，15℃/min升温至220℃，保持8min，FID检测器温度250℃，进样器温度230℃。理论板数按丁香酚峰计算应不低于30000（见图1）。
图1 丁香罗勒油空白溶剂、系统适用性、对照品GC图谱、供试品GC图谱
A.空白溶剂色谱图； B.系统适用性色谱图；
C.丁香酚对照品和内标正十八烷色谱图； D.丁香罗勒油供试品色谱图
2.2 内标液的制备
取正十八烷适量，精密称定，加正己烷溶解并稀释成每1ml含25mg的溶液，作为内标溶液。
2.3 对照品溶液的制备
取丁香酚对照品约50mg，精密称定，置10ml量瓶中，精密加入内标溶液2ml，用正己烷稀释至刻度，摇匀，取1μl注入气相色谱仪。
2.4 供试品溶液的制备
取供试品约60mg，精密称定，置10ml量瓶中，精密加入内标溶液2ml，用正己烷溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。取1μl注入气相色谱仪，测定，即得。
2.5 线性关系考察
分别取丁香酚5.00mg、15.00mg、25.0mg、35.0mg、45.0mg于10ml量瓶，并按本标准加入2ml内标液，用正己烷定容至10ml作供试品，取1μl注入气相色谱仪，计算丁香酚与正十八烷峰面积比值。以丁香酚浓度（C）为横坐标，丁香酚与正十八烷峰面积比值（Y）为纵坐标绘制标准曲线，进行线性回归，结果得回歸方程：y=0.1311x-0.054（r=0.9994）。结果表明，丁香酚进样量在0.5～4.5 mg /ml范围内线性关系良好。
2.6 重复性试验
取同批样品6份（批号060701），按供试品溶液制备方法处理，在上述色谱条件下测定含量，测得丁香酚的平均值为86.73%，RSD=0.14%，结果表明本方法重复性良好。
2.7 稳定性试验
取批号060701丁香罗勒油供试品溶液在0、2、4、6、8、10小时进样，测得丁香酚与正十八烷峰面积比值，RSD为0.89%（n=6），结果表明样品溶液在10小时内稳定。
2.8 回收率试验
精密称取批号060701丁香罗勒油（本品已知丁香酚含量：86.7%）分别30.0mg于9只10ml容量瓶中，分别加入19.0mg、19.0mg、19.0mg、24.0mg、24.0mg、24.0mg、29.0mg、29.0mg、29.0mg丁香酚对照品，分别加入2ml内标溶液，按上述色谱条件测定，结果见表1。平均加样回收率为100.96%，RSD为0.74%。
表1 回收率实验测定结果（n=9）
取本品量mg 本品含丁香酚mg 加入丁香酚mg 实际测得总量mg 回收率% 平均回收率% RSD
%
1 29.78 25.82 18.87 44.68 99.95 100.96 0.74
2 29.67 25.72 19.15 44.94 100.37
3 29.89 25.91 19.06 45.14 100.89
4 30.43 26.38 24.43 50.81 100.00
5 30.68 26.60 24.30 51.24 101.40
6 30.78 26.69 24.28 51.36 101.61
7 29.62 25.68 28.99 54.91 100.83 8 29.58 25.65 29.38 55.60 101.94
9 29.70 25.75 29.03 55.26 101.65
2.9 样品测定
分别取3个批号的丁香罗勒油适量，精密称定制备供试品溶液，依法测定丁香酚含量，结果见表2。
表2 丁香油中丁香酚的含量
批号 含量（%）
060701 88.0
060702 86.8
060703 86.2
3 讨论
3.1 分析方法的选择
经查阅文献，目前测定丁香罗勒油中丁香酚含量的方法主要以气相色谱法为主，气相色谱法又可分内标法和外標法，固定相有采用PEG-20M [3] [4]、SE-30[1] [5]、FFAP[6]三种毛细管色谱柱，《中国药典》2010年版丁香罗勒油方法为气相色谱填充柱[1] [3] [4]法进行分析。本实验结合参考文献及实际操作，选择毛细管色谱柱的内标法测定丁香罗勒油中丁香酚含量，并进行研究和考察。结果表明：选择固定液为OV-1的毛细管柱色谱条件下，分析时间短，分离度好，专属性强、色谱峰形良好。
3.2 内标物的选择
选择内标物的原则优先选择与被测成份的极性和沸点接近的物质，从而使内标峰的保留时间与被测成份的保留时间相近的，但在实际检测中发现，与被测成份的保留时间相近的位置已有很多成份，内标物不好选择，据文献资料报道，丁香罗勒油中含水杨酸甲酯[2]，但《中国药典》2010年版中气相色谱法中却用水杨酸甲酯作为内标物，因此可能会影响含量测定的准确性，本方法将水杨酸甲酯改为正十八烷作为内标物。
参考文献
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[M]，一部.北京.中国医药科技出版社，2010：365.
[2] 李玲玲， 赖东美， 叶飞云.丁香罗勒油的气相色谱与气质连用分析[J].福建分析测试研究报告，2000，9（2）：1222-1227.
[3] 王海英.气相色谱法测定丁香油中丁香酚含量[J]. 哈尔滨医药.2009，29（4）：20-21.
[4] 李玲玲， 赖东美， 叶飞云.丁香罗勒油的气相色谱分析[J].中国中药杂志，2000，25（4）：229-230.
[5] 张春成，高海，沈小红，等.丁香罗勒油中丁香酚的GC法测定[J].西北药学杂志.1994，14（2）：56-57.
[6] 谢敏，吴春敏，卓丹.气相色谱法测定丁香油中丁香酚含量[J]. 海峡药学.2003，15（5）：34-36.
关键词：GC法；丁香罗勒油；丁香酚
丁香罗勒油为唇形科植物丁香罗勒Ocimum gratissimum L. 的全草经水蒸气蒸馏提取的挥发油[1]。
参照《中国药典》2010年版一部丁香罗勒油标准，考虑到生产和检验实际，我们在方法中使用了毛细管柱，测定法为内标法。丁香罗勒油中成分复杂，成分有三十多种以上[2]，使用了毛细管柱相对填充柱更能有效分离丁香酚，更具专属性，有效缩短了检验时间。
经实验证明该毛细管柱内标法的峰分离度、理论塔板数都符合《中国药典》2010年版要求，且优于（药典）填充柱法，本毛细管柱内标法的准确度、重复性、精密度、线性均符合要求；两方法相比：采用毛细管柱方法提高了准确度和工作效率，分析时间短、专属性强、色谱峰形良好。
1 仪器与材料
Agilent GC1790F 气相色谱仪，氢离子火焰检测器（FID）；sartorius BP211D电子天平，丁香酚对照品批号：110725-200610，购于中国药品生物制品检定所；正己烷为分析纯（广州市化学试剂厂），正十八烷内标物[东京化成工业株式会社（TCI）]，丁香罗勒油（佛山市南海中南药化厂提供，批号：060701、060702、060703）。
2 方法与结果
2.1 色谱条件与系统适用性
气相色谱条件：30m×0.32mm×0.25μm OV-1石英毛细管柱；程序升温：起始温度100℃，保持1min，15℃/min升温至220℃，保持8min，FID检测器温度250℃，进样器温度230℃。理论板数按丁香酚峰计算应不低于30000（见图1）。
图1 丁香罗勒油空白溶剂、系统适用性、对照品GC图谱、供试品GC图谱
A.空白溶剂色谱图； B.系统适用性色谱图；
C.丁香酚对照品和内标正十八烷色谱图； D.丁香罗勒油供试品色谱图
2.2 内标液的制备
取正十八烷适量，精密称定，加正己烷溶解并稀释成每1ml含25mg的溶液，作为内标溶液。
2.3 对照品溶液的制备
取丁香酚对照品约50mg，精密称定，置10ml量瓶中，精密加入内标溶液2ml，用正己烷稀释至刻度，摇匀，取1μl注入气相色谱仪。
2.4 供试品溶液的制备
取供试品约60mg，精密称定，置10ml量瓶中，精密加入内标溶液2ml，用正己烷溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。取1μl注入气相色谱仪，测定，即得。
2.5 线性关系考察
分别取丁香酚5.00mg、15.00mg、25.0mg、35.0mg、45.0mg于10ml量瓶，并按本标准加入2ml内标液，用正己烷定容至10ml作供试品，取1μl注入气相色谱仪，计算丁香酚与正十八烷峰面积比值。以丁香酚浓度（C）为横坐标，丁香酚与正十八烷峰面积比值（Y）为纵坐标绘制标准曲线，进行线性回归，结果得回歸方程：y=0.1311x-0.054（r=0.9994）。结果表明，丁香酚进样量在0.5～4.5 mg /ml范围内线性关系良好。
2.6 重复性试验
取同批样品6份（批号060701），按供试品溶液制备方法处理，在上述色谱条件下测定含量，测得丁香酚的平均值为86.73%，RSD=0.14%，结果表明本方法重复性良好。
2.7 稳定性试验
取批号060701丁香罗勒油供试品溶液在0、2、4、6、8、10小时进样，测得丁香酚与正十八烷峰面积比值，RSD为0.89%（n=6），结果表明样品溶液在10小时内稳定。
2.8 回收率试验
精密称取批号060701丁香罗勒油（本品已知丁香酚含量：86.7%）分别30.0mg于9只10ml容量瓶中，分别加入19.0mg、19.0mg、19.0mg、24.0mg、24.0mg、24.0mg、29.0mg、29.0mg、29.0mg丁香酚对照品，分别加入2ml内标溶液，按上述色谱条件测定，结果见表1。平均加样回收率为100.96%，RSD为0.74%。
表1 回收率实验测定结果（n=9）
取本品量mg 本品含丁香酚mg 加入丁香酚mg 实际测得总量mg 回收率% 平均回收率% RSD
%
1 29.78 25.82 18.87 44.68 99.95 100.96 0.74
2 29.67 25.72 19.15 44.94 100.37
3 29.89 25.91 19.06 45.14 100.89
4 30.43 26.38 24.43 50.81 100.00
5 30.68 26.60 24.30 51.24 101.40
6 30.78 26.69 24.28 51.36 101.61
7 29.62 25.68 28.99 54.91 100.83 8 29.58 25.65 29.38 55.60 101.94
9 29.70 25.75 29.03 55.26 101.65
2.9 样品测定
分别取3个批号的丁香罗勒油适量，精密称定制备供试品溶液，依法测定丁香酚含量，结果见表2。
表2 丁香油中丁香酚的含量
批号 含量（%）
060701 88.0
060702 86.8
060703 86.2
3 讨论
3.1 分析方法的选择
经查阅文献，目前测定丁香罗勒油中丁香酚含量的方法主要以气相色谱法为主，气相色谱法又可分内标法和外標法，固定相有采用PEG-20M [3] [4]、SE-30[1] [5]、FFAP[6]三种毛细管色谱柱，《中国药典》2010年版丁香罗勒油方法为气相色谱填充柱[1] [3] [4]法进行分析。本实验结合参考文献及实际操作，选择毛细管色谱柱的内标法测定丁香罗勒油中丁香酚含量，并进行研究和考察。结果表明：选择固定液为OV-1的毛细管柱色谱条件下，分析时间短，分离度好，专属性强、色谱峰形良好。
3.2 内标物的选择
选择内标物的原则优先选择与被测成份的极性和沸点接近的物质，从而使内标峰的保留时间与被测成份的保留时间相近的，但在实际检测中发现，与被测成份的保留时间相近的位置已有很多成份，内标物不好选择，据文献资料报道，丁香罗勒油中含水杨酸甲酯[2]，但《中国药典》2010年版中气相色谱法中却用水杨酸甲酯作为内标物，因此可能会影响含量测定的准确性，本方法将水杨酸甲酯改为正十八烷作为内标物。
参考文献
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[M]，一部.北京.中国医药科技出版社，2010：365.
[2] 李玲玲， 赖东美， 叶飞云.丁香罗勒油的气相色谱与气质连用分析[J].福建分析测试研究报告，2000，9（2）：1222-1227.
[3] 王海英.气相色谱法测定丁香油中丁香酚含量[J]. 哈尔滨医药.2009，29（4）：20-21.
[4] 李玲玲， 赖东美， 叶飞云.丁香罗勒油的气相色谱分析[J].中国中药杂志，2000，25（4）：229-230.
[5] 张春成，高海，沈小红，等.丁香罗勒油中丁香酚的GC法测定[J].西北药学杂志.1994，14（2）：56-57.
[6] 谢敏，吴春敏，卓丹.气相色谱法测定丁香油中丁香酚含量[J]. 海峡药学.2003，15（5）：34-36.