Ubiquitin真核表达载体构建及在293T细胞中的表达

来源 :石河子大学学报(自然科学版) | 被引量 : 0次 | 上传用户：a175758624

【摘要】

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为构建泛素分子pcDNA3.1-Myc-ubiquitin真核表达载体,实现其在293T细胞中表达。采用人工合成ubiquitin基因序列并加入c-Myc标签序列及EcoRⅠ和BamHⅠ酶切位点的方法,克隆至pc

【作者】

：

郑艳汪海燕王旭晖黄瑾

【机构】

：

f石河子大学医学院/新疆地方与民族高发病教育部重点实验室

【出处】

：

石河子大学学报(自然科学版)

【发表日期】

：

2014年4期

【关键词】

：

Ubiquitin Western blot 亚细胞定位

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为构建泛素分子pcDNA3.1-Myc-ubiquitin真核表达载体,实现其在293T细胞中表达。采用人工合成ubiquitin基因序列并加入c-Myc标签序列及EcoRⅠ和BamHⅠ酶切位点的方法,克隆至pcDNA3.1真核表达载体中。重组表达质粒经PCR和测序鉴定正确后,脂质体法转染入293T细胞。Western blot和间接免疫荧光法分析重组质粒在细胞中的蛋白表达及定位情况。菌落PCR及测序等分析结果显示：成功构建了pcDNA3.1-Myc-ubiquitin真核表达载体。免疫荧光和Wester

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