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目的 观察弓形虫感染对小鼠和人子宫自然杀伤细胞(uterine natural killer cells,uNK cells)比例、数量、分化和功能的影响,探讨uNK细胞在弓形虫感染致早孕流产中的作用。方法 妊娠第6.5天给予孕鼠腹腔注射弓形虫速殖子,建立孕早期弓形虫感染致流产小鼠模型,妊娠第9.5天分离小鼠子宫淋巴细胞。取人正常妊娠孕早期流产新鲜蜕膜组织,分离人子宫淋巴细胞,与弓形虫RH株速殖子体外共培养48 h(弓形虫与子宫淋巴细胞比例分别为0.5:1、1:1、2:1)。采用流式细胞术检测小鼠uNK细胞表型(CD122、NK1.1、DX5)、人uNK细胞表型(CD3、CD56、CC11b、CD27)及胞内细胞因子γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)表达水平。磁珠分选小鼠和人uNK细胞,以小鼠YAC-1或人K562细胞作为靶细胞、以小鼠或人uNK细胞作为效应细胞,采用乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放法检测效应细胞/靶细胞比例分别为1:1、5:1、10:1、20:1时uNK细胞的杀伤功能。结果 妊娠第9.5天,弓形虫感染组小鼠流产率较对照组显著上升(83.02%vs.3.51%;χ~2=71.359,P <0.001)。与对照组比较,弓形虫感染组小鼠uNK细胞绝对数量显著降低[(4 547±1 610)个/只vs.(8 978±3 339)个/只;U=2.000,P<0.05]、细胞表面NK1.1表达水平显著下降[(74.53±8.37)%vs.(93.00±1.11)%;U=0.000,P<0.05]、NK1.1-DX5-细胞比例显著上升[(20.10±8.03)%vs.(5.04±0.68)%;U=0.000,P <0.05]、NK1.1+DX5+细胞比例显著下降[(21.70±12.48)%vs.(45.75±2.26)%;U=0.000,P <0.05]、IFN-γ表达水平显著升高[(16.74±1.36)%vs.(8.13±1.90)%;U=0.000,P <0.05],但TNF-α表达水平无显著改变[(67.98±9.20)%vs.(52.93±10.42)%;U=2.000,P> 0.05]。弓形虫感染组小鼠uNK细胞表现出较强杀伤能力,且杀伤作用随着效应细胞/靶细胞比例升高逐渐增强;效应细胞/靶细胞比例为1:1、5:1、10:1、20:1时,感染组uNK细胞对YAC-1细胞的杀伤活性分别为2.30%、4.32%、8.12%和12.65%,对照组分别为1.21%、1.63%、2.51%和3.22%。将人子宫淋巴细胞与弓形虫RH株速殖子共培养48 h后,弓形虫感染组人uNK细胞在子宫淋巴细胞中所占比例较对照组显著降低[弓形虫2:1组vs.对照组:(6.61±1.75)%vs.(17.48±4.81)%;F=7.307,P<0.01]、绝对数量显著减少[弓形虫2:1组vs.对照组:(12 104±5 726)个/孔vs.(65 285±21 810)个/孔;H=11.540,P<0.01]。弓形虫感染组uNK细胞中,CD56brightCD16-调节型NK细胞亚群比例较对照组减少(弓形虫2:1组vs.对照组:(25.25±5.90)%vs.(36.03±4.51)%;F=3.213,P> 0.05]、CD56dimCD16+杀伤型NK细胞亚群比例增加[弓形虫2:1组vs.对照组:(11.15±2.15)%vs.(7.09±2.24)%,F=2.992,P> 0.05],两者比值显著降低[弓形虫2:1组vs.对照组:(2.37±0.92)vs.(5.58±2.39);H=8.228,P <0.05];CD11b+CD27-细胞比例显著上升[(弓形虫2:1组vs.对照组:(30.28±6.91)%vs.(17.48±4.67)%;H=6.556,P<0.05],IFN-γ[弓形虫2:1组vs.对照组:(14.13±1.28)%vs.(15.19±1.64)%;F=1.639,P> 0.05]、TNF-α表达水平无显著改变[弓形虫2:1组vs.对照组:(54.76±10.02)%vs.(50.33±3.67)%;F=0.415,P> 0.05]。弓形虫感染组人uNK细胞具有较强杀伤能力,且杀伤作用随着效应细胞/靶细胞比例升高逐渐增强;效应细胞/靶细胞比例为1:1、5:1、10:1、20:1时,感染组uNK细胞对K562细胞的杀伤活性分别为11.90%、28.11%、49.91%和73.35%,对照组分别为11.21%、21.63%、33.51%和48.22%。结论 弓形虫感染对小鼠和人uNK细胞分化和分泌功能产生了不同影响,但均可引起小鼠和人uNK细胞绝对数量减少、杀伤功能增强。