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摘要：目的：建立救心丸的中蟾酥的含量测定方法。方法 ：采用高效液相色谱法对蟾酥中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基总量进行了含量测定。结果 用高效液相色谱法对华蟾酥毒基和脂蟾毒配基总量进行了含量测定，华蟾酥毒基进样量在0.40832～2.04160μg之间有良好的线性关系；脂蟾毒配基在0.4204～2.1020（μg）之间有良好的线性关系；华蟾酥毒基平均回收率为98.3%，RSD=1.2%；脂蟾毒配基平均回收率为98.6%，RSD=1.1%。结论 ：方法专属性强，重现性好，回收率良好，可有效控制救心丸的产品质量。
关键词：救心丸；HPLC；华蟾酥毒基；脂蟾毒配基；含量测定
【中图分类号】R914.1 【文献标识码】A【文章编号】1002-3763（2014）-0121-02
救心丸收载于卫生部药品标准中药成方制剂第十九册，具有活血化瘀、化痰通络的功能，由八味人工麝香、人工牛黄、珍珠、人参茎叶总皂苷、牛胆膏粉、冰片、蟾酥、三七膏粉药材组成。目前质量标准中尚无含量测定，仅有显微、理化鉴别，为更好的控制产品质量，本实验采用HPLC法对方中蟾酥中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基总量进行了含量测定，能进一步控制产品质量。
试验仪器与材料
1.仪器与试药
仪器：岛津LC-10ADvp高效液相色谱仪；SPD-M10Avp二级管阵列检测器；色谱柱：安捷伦Extend-C18，（150×4.6mm，5μm）。
试剂：乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其它试剂均为分析纯。对照品：华蟾酥毒基、脂蟾毒配基为中国药品生产制品检定所提供（批号分别为：803-9202、718-9205供含量测定用）。
2 方法与结果
2.1色谱条件的确定 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂； 以0.5%磷酸二氢钾-乙腈（50：50）流动相（用磷酸调PH值为3.2），检测波长为296nm，理论板数按华蟾酥毒基峰计算应不低于4000
2.2阴性干扰性试验 按处方比例制备缺蟾酥阴性样品，按含量测定项下供试品溶液的制备方法制成缺蟾酥的阴性对照溶液，并进行含量测定。结果阴性对照溶液在华蟾酥毒基峰和脂蟾毒配基峰相同保留时间处无吸收峰。
2.3、对照品溶液的制备 称取经五氧化二磷减压干燥24小时的华蟾酥毒基对照品、脂蟾毒配基对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml各含50μg的溶液，即得。
2.4、供试品溶液的制备 取重量差异项下的本品30粒，研细，取约0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20ml，称定重量，密塞，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
2.5、精密度的考察
2.5.1 华蟾酥毒基精密度的考察 精密吸取华蟾酥毒基对照品溶液（0.05104mg/ml）20μl，注入液相色谱仪，重复5次，测定峰面积，结果见表1
2.6、线性范围的考察
2.6.1华蟾酥毒基线性范围的考察 分别精密吸取对照品溶液（0.10208mg/ml）2ml，4ml，6ml，8ml，10ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，分别精密吸取20μl，注入高效液相色谱仪，测得峰面积。见表3
2.7、稳定性考察 称取样品约0.25g，照救心丸含量测定项下供试品溶液的制备处理，精密吸取同一供试品溶液20μl，分别在0，2，4，8，24小时，测定峰面积，华蟾酥毒基、脂蟾毒配基稳定性。结果见表5。
2.8、重现性考察 精密称取同一批号的救心丸，共5份，照救心丸含量测定项下方法测定，华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的总量，结果见表6。
2.9、加样回收率考察 精密称取重现性考察用样品适量，分别精密添加一定量的华蟾酥毒基、脂蟾毒配基对照品，照本文含量测定方法测定，计算加样回收率，结果见表7。
2.10、测定法 按[含量测定]项下测定方法测定三批样品，结果见表8。
由表8可知，本品三批华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的总量的平均值为119μg /粒。
救心丸中含量测定华蟾酥毒基和脂蟾毒配基总量的确定：根据中国药典“蟾酥”项下的含量限度计算，建议本品成品中每粒含蟾酥以华蟾酥毒基（C26H34O6）和脂蟾毒配基（C24H32O4）的总量不得少于86μg/粒。
参考文献：
[1] 白雪、张莉、齐刚，蟾酥的鉴别检查和含量测定方法，《时珍国医国药》2004年04期。
[2] 郑笑为等，HPLC测定牛黄消炎片中的华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的含量，《药物分析》杂志2013·33·第10期。
[3] 姚英，郭安，吴伟.麝香保心丸中脂蟾毒配基的含量测定，上海中医药杂志，2002，（9）：41
[4] 段晓颖，李强.HPLC法测定益肝康胶囊中华蟾酥毒基与脂蟾毒配基的含量.中国药房，2009，20（30）：2364
[5] 王捧英，陈琳，侯芳洁，HPLC同时测定人参强心滴丸中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的含量.药物分析杂志，2012，32（5）：802
关键词：救心丸；HPLC；华蟾酥毒基；脂蟾毒配基；含量测定
【中图分类号】R914.1 【文献标识码】A【文章编号】1002-3763（2014）-0121-02
救心丸收载于卫生部药品标准中药成方制剂第十九册，具有活血化瘀、化痰通络的功能，由八味人工麝香、人工牛黄、珍珠、人参茎叶总皂苷、牛胆膏粉、冰片、蟾酥、三七膏粉药材组成。目前质量标准中尚无含量测定，仅有显微、理化鉴别，为更好的控制产品质量，本实验采用HPLC法对方中蟾酥中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基总量进行了含量测定，能进一步控制产品质量。
试验仪器与材料
1.仪器与试药
仪器：岛津LC-10ADvp高效液相色谱仪；SPD-M10Avp二级管阵列检测器；色谱柱：安捷伦Extend-C18，（150×4.6mm，5μm）。
试剂：乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其它试剂均为分析纯。对照品：华蟾酥毒基、脂蟾毒配基为中国药品生产制品检定所提供（批号分别为：803-9202、718-9205供含量测定用）。
2 方法与结果
2.1色谱条件的确定 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂； 以0.5%磷酸二氢钾-乙腈（50：50）流动相（用磷酸调PH值为3.2），检测波长为296nm，理论板数按华蟾酥毒基峰计算应不低于4000
2.2阴性干扰性试验 按处方比例制备缺蟾酥阴性样品，按含量测定项下供试品溶液的制备方法制成缺蟾酥的阴性对照溶液，并进行含量测定。结果阴性对照溶液在华蟾酥毒基峰和脂蟾毒配基峰相同保留时间处无吸收峰。
2.3、对照品溶液的制备 称取经五氧化二磷减压干燥24小时的华蟾酥毒基对照品、脂蟾毒配基对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml各含50μg的溶液，即得。
2.4、供试品溶液的制备 取重量差异项下的本品30粒，研细，取约0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20ml，称定重量，密塞，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
2.5、精密度的考察
2.5.1 华蟾酥毒基精密度的考察 精密吸取华蟾酥毒基对照品溶液（0.05104mg/ml）20μl，注入液相色谱仪，重复5次，测定峰面积，结果见表1
2.6、线性范围的考察
2.6.1华蟾酥毒基线性范围的考察 分别精密吸取对照品溶液（0.10208mg/ml）2ml，4ml，6ml，8ml，10ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，分别精密吸取20μl，注入高效液相色谱仪，测得峰面积。见表3
2.7、稳定性考察 称取样品约0.25g，照救心丸含量测定项下供试品溶液的制备处理，精密吸取同一供试品溶液20μl，分别在0，2，4，8，24小时，测定峰面积，华蟾酥毒基、脂蟾毒配基稳定性。结果见表5。
2.8、重现性考察 精密称取同一批号的救心丸，共5份，照救心丸含量测定项下方法测定，华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的总量，结果见表6。
2.9、加样回收率考察 精密称取重现性考察用样品适量，分别精密添加一定量的华蟾酥毒基、脂蟾毒配基对照品，照本文含量测定方法测定，计算加样回收率，结果见表7。
2.10、测定法 按[含量测定]项下测定方法测定三批样品，结果见表8。
由表8可知，本品三批华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的总量的平均值为119μg /粒。
救心丸中含量测定华蟾酥毒基和脂蟾毒配基总量的确定：根据中国药典“蟾酥”项下的含量限度计算，建议本品成品中每粒含蟾酥以华蟾酥毒基（C26H34O6）和脂蟾毒配基（C24H32O4）的总量不得少于86μg/粒。
参考文献：
[1] 白雪、张莉、齐刚，蟾酥的鉴别检查和含量测定方法，《时珍国医国药》2004年04期。
[2] 郑笑为等，HPLC测定牛黄消炎片中的华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的含量，《药物分析》杂志2013·33·第10期。
[3] 姚英，郭安，吴伟.麝香保心丸中脂蟾毒配基的含量测定，上海中医药杂志，2002，（9）：41
[4] 段晓颖，李强.HPLC法测定益肝康胶囊中华蟾酥毒基与脂蟾毒配基的含量.中国药房，2009，20（30）：2364
[5] 王捧英，陈琳，侯芳洁，HPLC同时测定人参强心滴丸中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的含量.药物分析杂志，2012，32（5）：802