观察不同浓度人羊膜匀浆上清液(hAHS)对体外培养的SD大鼠角朊细胞生长的影响。
方法取SD大鼠背部皮肤，采用中性蛋白酶与胰蛋白酶复合消化的方法，分离第一代角朊细胞。将新鲜人羊膜制备成hAHS，采用考马斯亮蓝法、酶联免疫吸附试验分别测定hAHS中总蛋白含量和表皮生长因子(EGF)、碱性成纤维生长因子(bFGF)、血管内皮生长因子(VEGF)的浓度。用不同浓度hAHS对第一代角朊细胞进行体外培养：将细胞以2.5×104个/mL密度接种于96孔板中(每孔100 μL)，随机数字表法将其分为体积分数0(对照组)及10%、15%、20%、25% hAHS组，用含10%胎牛血清低糖培养基培养24 h后，根据hAHS在低糖DMEM培养基中的不同体积分数进行换液，分别于培养即刻和培养24、48、96 h，用噻唑兰法检测各孔的吸光度值并绘制角朊细胞的生长曲线和计算各组细胞增殖率。采用SPSS13.0统计软件进行分析，各不同体积分数hAHS组的数据与对照组比较采用Dunnett－t检验。
结果hAHS中总蛋白含量为(675.435±9.215)×10－3 g/L，EGF、bFGF和VEGF的浓度分别为(470.625±2.546)×10－6、(4.121±0.026)×10－6和(0.172±0.002)×10－6 g/L。与对照组比较，10% hAHS组培养48、96 h角朊细胞增殖率明显高于对照组，差异均有显著性统计学意义(t＝4.644、9.694，P值均小于0.01)，15% hAHS组培养48、96 h角朊细胞增殖率均明显高于对照组，差异均有显著性统计学意义(t＝4.766、6.648，P值均小于0.01)；20% hAHS组培养24 h角朊细胞增殖率高于对照组，差异有统计学意义(t＝2.272，P<0.05)，培养48、96 h增殖率均明显高于对照组，差异有显著性统计学意义(t＝5.027、8.861，P值均小于0.01)；25% hAHS组培养48 h增殖率低于对照组，差异有统计学意义(t＝2.188，P<0.05)，培养96 h增殖率明显低于对照组，差异有显著性统计学意义(t＝5.147，P<0.01)。
结论体积分数10%、15%、20% hAHS对体外培养的角朊细胞增殖有明显促进作用，且促增殖的效果随hAHS体积分数的增加而增强，但hAHS的体积分数在25%时角朊细胞的增殖受到抑制，平稳期相对缩短。