【摘 要】
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为了探索适用于节瓜ISSR-PCR反应的反应体系以及得到适用于该体系的ISSR引物,首先利用正交实验的方法对节瓜ISSR-PCR反应体系的三因素(模板,2×sanTaq PCR mix预混液,引物)的
【机 构】
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上海市农业科学院设施园艺研究所,上海市设施园艺技术重点实验室,上海,201403;上海市农业科学院农业科技信息研究所,上海,201403
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为了探索适用于节瓜ISSR-PCR反应的反应体系以及得到适用于该体系的ISSR引物,首先利用正交实验的方法对节瓜ISSR-PCR反应体系的三因素(模板,2×sanTaq PCR mix预混液,引物)的工作浓度进行优化.然后依据Tm值的差异将引物分成了三组,每组分别设定不同的退火温度,以节瓜基因组DNA为模板进行PCR扩增,经2％琼脂糖凝胶电泳和UVP成像,结果表明,第二组引物扩增条带的数目、清晰度明显优于第一组和第三组的引物扩增的条带,第二组45℃退火条件下的扩增情况明显优于在40℃退火条件下的扩增.因此,通过实验与分析,确定了节瓜ISSR-PCR反应体系是DNA模板(50 ng/μL)2 μL、2×sanTaq PCR mix预混液10 μL、引物(10 μmol/L)1μL,筛选到了18条适合在节瓜的ISSR-PCR反应中应用的引物,其最适合的退火温度是45℃.
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