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1.选择适宜的品种
选择在本地经过栽培试验且表现良好的菌株,要求具备高产稳产,抗逆性强,产品质量好等特点。在敦化市表现较好的品种有长白山7号、黑29、丰收2号等。
2.母种制作
2.1 培养基配方及制作方法
2.1.1马铃薯葡萄糖琼脂培养基 将马铃薯洗净、去皮、挖眼、切片,取洗净的切片200g,在干净的铝锅内用1L水煮沸20～30分钟,以熟而不烂为度,用8层纱布过滤,将滤液倒回干净的铝锅内,称取20g琼脂用水洗净后将水挤出,放入滤液中加热,用玻璃棒搅拌直至琼脂融化,再用8层纱布过滤将滤液补足1L放回铝锅,加入20g葡萄糖,继续用玻璃棒搅拌加热至葡萄糖融化。趁热分装试管(18×180mm或20×200mm试管),装入量以试管的1/5为宜,塞好棉塞,将试管口向上直立或斜放。
2.1.2马铃薯半合成培养基 与马铃薯葡萄糖琼脂培养基的制作方法相似,在加入葡萄糖的同时加入硫酸镁、磷酸二氢钾和维生素B1。
2.2 母种培养基灭菌
培养基进行试管分装后及时灭菌。每10支试管捆绑在一起,并用牛皮纸或报纸包裹,直立放入高压锅内,盖好锅盖,打开排气阀开始加热,当排气阀急速排出热气时,关闭排气阀,气压升至0.1Mpa时维持30分钟后停止加热,气压降至0.05Mpa时打开排气阀,气压归零时拧开螺栓将锅盖错开缝,以烘干棉塞,几分钟之后打开锅盖。
2.3 摆斜面
试管取出马上摆斜面,以底部培养基刚好达到试管底的1/2,上部培养基刚好接近棉塞为度,一支挨一支摆好,并在上面盖一层报纸,以防降温过快而导致试管壁上形成过多的冷凝水。冷却定形后收起备用。
2.4 无菌室及接菌箱灭菌
接菌前一天要对无菌室及接菌箱进行严格的消毒灭菌。用甲醛、高锰酸钾加热熏蒸灭菌或用消毒盒进行熏蒸灭菌。
2.5 接菌
2.5.1 利用超净工作台接菌 打开超净工作台紫外杀菌30分钟后方可进行接菌,用酒精擦双手及菌种试管表面,待接种器具经酒精灯火焰杀菌冷却后,在酒精灯火焰上方的无菌区内进行接菌。
2.5.2 利用接菌箱接菌 将待接菌试管放入接菌箱内,用甲醛、高锰酸钾或消毒盒进行熏蒸灭菌。用酒精擦拭双手及菌种试管进行消毒,待接种器具经酒精灯火焰杀菌冷却后,在酒精灯火焰上方的无菌区内接菌。
2.6 母种培养
接菌后将试管放入恒温箱内,维持28℃恒温。10天后即可长满斜面。
3. 原种制作
3.1 原种培养基配方及制作
3.1.1锯木屑培养基 原料按比例称取,先将锯木屑、麦麸、石膏混合,将蔗糖溶入适量水中后拌入混合料中,使含水量达到60%～65%,即以手握紧培养料后指缝间见水但不下滴为宜。装瓶(用750ml原种瓶或500ml点滴瓶),用棉塞封口。
3.1.2 玉米粒培养基 将玉米粒浸泡12小时以上,然后在沸水中煮半小时,以玉米粒变软膨大且不开裂为度,拌入玉米粒干物质重的1%的石膏,装瓶。
3.2 原种培养基灭菌
3.2.1 高压灭菌 将瓶装入高压锅后迅速加温,气压达到0.05Mpa时打开排气阀将冷空气排净,然后关闭排气阀,当气压达到0.15Mpa时维持此气压2小时,停止加热,待气压降至0.05Mpa开启排气阀,至气压归零后打开高压锅,出锅冷却。
3.2.2 常压灭菌 将瓶放入常压锅后加温,升温速度越快越好,温度要求在5小时内达到100℃,维持8小时后停火,打开锅盖,出锅冷却。
3.3 接菌
将装瓶灭菌后的原种培养基拿入接菌室超静工作台上或接菌箱内接菌。每支母种接5～6瓶原种,最多不超过10支,以提高成品率。
3.4 原种发菌管理
原种接菌后一般放入小型培养室进行发菌:温度25℃～28℃,宁低勿高,因为适当的低温条件发菌速度虽然稍慢,但长出的菌丝洁白、健壮有力;勤通风,以提高培养室空气中O2含量,满足发菌要求。
4. 栽培种制作
4.1 栽培种培养基配方及制作方法 将锯木屑、麦麸、石膏、白灰等原料按比例称取混合,然后加水并混拌均匀,使含水量达到60%～65%。即以手握紧培养料后指缝间见水但不下滴为宜。装袋(16.5×33cm或16.5×35cm规格的菌袋,若用高压灭菌必须选用丙烯袋,常压灭菌选用丙烯或乙烯袋皆可),装袋后封口可用无棉盖体、口项圈塞棉花、抿口等。
4.2 培養基灭菌 装袋后马上进行高压或常压灭菌。
4.3 接菌室或接菌箱灭菌 用甲醛、高锰酸钾加热熏蒸灭菌或用消毒盒进行熏蒸灭菌。
4.4 接菌 将装袋灭菌后的栽培种培养基拿入接菌室超静工作台上或接菌箱内接菌。其程序和方法参见母种和原种接菌。每瓶原种接30～45袋栽培种。
4.5 栽培种发菌管理 温度25℃～28℃,勤通风,以满足发菌的环境条件要求。北方黑木耳袋料栽培是利用栽培种直接出耳的,栽培种的质量及抗逆性是栽培成败的关键,因此,必须严格控制发菌条件,以提高菌种质量,为高产稳产夯实基础。
选择在本地经过栽培试验且表现良好的菌株,要求具备高产稳产,抗逆性强,产品质量好等特点。在敦化市表现较好的品种有长白山7号、黑29、丰收2号等。
2.母种制作
2.1 培养基配方及制作方法
2.1.1马铃薯葡萄糖琼脂培养基 将马铃薯洗净、去皮、挖眼、切片,取洗净的切片200g,在干净的铝锅内用1L水煮沸20～30分钟,以熟而不烂为度,用8层纱布过滤,将滤液倒回干净的铝锅内,称取20g琼脂用水洗净后将水挤出,放入滤液中加热,用玻璃棒搅拌直至琼脂融化,再用8层纱布过滤将滤液补足1L放回铝锅,加入20g葡萄糖,继续用玻璃棒搅拌加热至葡萄糖融化。趁热分装试管(18×180mm或20×200mm试管),装入量以试管的1/5为宜,塞好棉塞,将试管口向上直立或斜放。
2.1.2马铃薯半合成培养基 与马铃薯葡萄糖琼脂培养基的制作方法相似,在加入葡萄糖的同时加入硫酸镁、磷酸二氢钾和维生素B1。
2.2 母种培养基灭菌
培养基进行试管分装后及时灭菌。每10支试管捆绑在一起,并用牛皮纸或报纸包裹,直立放入高压锅内,盖好锅盖,打开排气阀开始加热,当排气阀急速排出热气时,关闭排气阀,气压升至0.1Mpa时维持30分钟后停止加热,气压降至0.05Mpa时打开排气阀,气压归零时拧开螺栓将锅盖错开缝,以烘干棉塞,几分钟之后打开锅盖。
2.3 摆斜面
试管取出马上摆斜面,以底部培养基刚好达到试管底的1/2,上部培养基刚好接近棉塞为度,一支挨一支摆好,并在上面盖一层报纸,以防降温过快而导致试管壁上形成过多的冷凝水。冷却定形后收起备用。
2.4 无菌室及接菌箱灭菌
接菌前一天要对无菌室及接菌箱进行严格的消毒灭菌。用甲醛、高锰酸钾加热熏蒸灭菌或用消毒盒进行熏蒸灭菌。
2.5 接菌
2.5.1 利用超净工作台接菌 打开超净工作台紫外杀菌30分钟后方可进行接菌,用酒精擦双手及菌种试管表面,待接种器具经酒精灯火焰杀菌冷却后,在酒精灯火焰上方的无菌区内进行接菌。
2.5.2 利用接菌箱接菌 将待接菌试管放入接菌箱内,用甲醛、高锰酸钾或消毒盒进行熏蒸灭菌。用酒精擦拭双手及菌种试管进行消毒,待接种器具经酒精灯火焰杀菌冷却后,在酒精灯火焰上方的无菌区内接菌。
2.6 母种培养
接菌后将试管放入恒温箱内,维持28℃恒温。10天后即可长满斜面。
3. 原种制作
3.1 原种培养基配方及制作
3.1.1锯木屑培养基 原料按比例称取,先将锯木屑、麦麸、石膏混合,将蔗糖溶入适量水中后拌入混合料中,使含水量达到60%～65%,即以手握紧培养料后指缝间见水但不下滴为宜。装瓶(用750ml原种瓶或500ml点滴瓶),用棉塞封口。
3.1.2 玉米粒培养基 将玉米粒浸泡12小时以上,然后在沸水中煮半小时,以玉米粒变软膨大且不开裂为度,拌入玉米粒干物质重的1%的石膏,装瓶。
3.2 原种培养基灭菌
3.2.1 高压灭菌 将瓶装入高压锅后迅速加温,气压达到0.05Mpa时打开排气阀将冷空气排净,然后关闭排气阀,当气压达到0.15Mpa时维持此气压2小时,停止加热,待气压降至0.05Mpa开启排气阀,至气压归零后打开高压锅,出锅冷却。
3.2.2 常压灭菌 将瓶放入常压锅后加温,升温速度越快越好,温度要求在5小时内达到100℃,维持8小时后停火,打开锅盖,出锅冷却。
3.3 接菌
将装瓶灭菌后的原种培养基拿入接菌室超静工作台上或接菌箱内接菌。每支母种接5～6瓶原种,最多不超过10支,以提高成品率。
3.4 原种发菌管理
原种接菌后一般放入小型培养室进行发菌:温度25℃～28℃,宁低勿高,因为适当的低温条件发菌速度虽然稍慢,但长出的菌丝洁白、健壮有力;勤通风,以提高培养室空气中O2含量,满足发菌要求。
4. 栽培种制作
4.1 栽培种培养基配方及制作方法 将锯木屑、麦麸、石膏、白灰等原料按比例称取混合,然后加水并混拌均匀,使含水量达到60%～65%。即以手握紧培养料后指缝间见水但不下滴为宜。装袋(16.5×33cm或16.5×35cm规格的菌袋,若用高压灭菌必须选用丙烯袋,常压灭菌选用丙烯或乙烯袋皆可),装袋后封口可用无棉盖体、口项圈塞棉花、抿口等。
4.2 培養基灭菌 装袋后马上进行高压或常压灭菌。
4.3 接菌室或接菌箱灭菌 用甲醛、高锰酸钾加热熏蒸灭菌或用消毒盒进行熏蒸灭菌。
4.4 接菌 将装袋灭菌后的栽培种培养基拿入接菌室超静工作台上或接菌箱内接菌。其程序和方法参见母种和原种接菌。每瓶原种接30～45袋栽培种。
4.5 栽培种发菌管理 温度25℃～28℃,勤通风,以满足发菌的环境条件要求。北方黑木耳袋料栽培是利用栽培种直接出耳的,栽培种的质量及抗逆性是栽培成败的关键,因此,必须严格控制发菌条件,以提高菌种质量,为高产稳产夯实基础。