【摘 要】
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目的 探讨一种高效、可重复的宫颈上皮细胞原代培养方法。方法 本研究选取4例正常宫颈组织和4例宫颈鳞状细胞癌组织，并分别采用Ⅱ型中性蛋白酶联合0.25%胰蛋白酶-EDTA （中性蛋白酶联合法）及Ⅰ型胶原酶消化法分离后进行原代培养。通过CD326、P40以及Ki-67+P16双染进行免疫荧光染色鉴定细胞来源。结果 正常宫颈上皮细胞原代培养14 d，汇合度可达70%～80%，传代可至4～5代，且荧光染色
【机 构】
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中国医科大学附属盛京医院生物样本库
【基金项目】
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国家自然科学基金（82000076）；
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目的 探讨一种高效、可重复的宫颈上皮细胞原代培养方法。方法 本研究选取4例正常宫颈组织和4例宫颈鳞状细胞癌组织，并分别采用Ⅱ型中性蛋白酶联合0.25%胰蛋白酶-EDTA （中性蛋白酶联合法）及Ⅰ型胶原酶消化法分离后进行原代培养。通过CD326、P40以及Ki-67+P16双染进行免疫荧光染色鉴定细胞来源。结果 正常宫颈上皮细胞原代培养14 d，汇合度可达70%～80%，传代可至4～5代，且荧光染色CD326、P40均表达强阳性，P16表达弱阳性，Ki-67仅在个别细胞核中表达；宫颈鳞状细胞癌细胞原代培养14 d，汇合度可达70%～80%，传代可至5～6代，荧光染色CD326和P40均表达强阳性，P16表达阳性，Ki-67广泛表达于细胞核。结论 Ⅱ型中性蛋白酶联合0.25%胰蛋白酶-EDTA分离法及5%FBS的KFSM培养基可高效、多次重复原代培养正常宫颈上皮细胞；Ⅰ型胶原酶消化分离法及5%FBS的KFSM培养基培养可高效、多次重复原代培养宫颈鳞状细胞癌细胞。
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