【摘 要】
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目的 构建牛乳腺炎无乳链球菌cylE基因缺失突变菌株,为进一步开展其致病机制与免疫机制研究奠定实验基础. 方法 参考GenBank上公布的无乳链球菌cylE基因上、下游序列(AF15701
【机 构】
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内蒙古民族大学生命科学学院,内蒙古自治区乳源性致病菌防控工程技术研究中心,内蒙古民族大学乳源性致病菌研究所,内蒙古通辽028043
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目的 构建牛乳腺炎无乳链球菌cylE基因缺失突变菌株,为进一步开展其致病机制与免疫机制研究奠定实验基础. 方法 参考GenBank上公布的无乳链球菌cylE基因上、下游序列(AF157015.2),利用primer 5.0生物信息软件设计扩增引物,经PCR扩增出cylE基因上游序列L、下游序列R,并根据pACYC184质粒氯霉素抗性基因cat r序列设计引物,扩增cat r基因片段C,依次将L、R和C片段克隆至温敏型自杀质粒pSET4S中,构建cylE基因缺失重组质粒pSET4S-LCR,通过电转化技术将其转化至无乳链球菌,通过温度和抗生素抗性筛选cylE缺失突变株. 结果 经PCR和溶血表型鉴定结果表明,成功获得1株牛乳腺炎无乳链球菌β溶血素cylE基因缺失突变菌株. 结论 为进一步研究其致病机制与免疫机制奠定了良好的研究基础.
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