【摘 要】
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目的通过基因转染方法,使成纤维细胞NIH-3T3细胞具有合成及分泌骨形态发生蛋白(BMP)、体内诱导新骨生成的能力.方法定向克隆法将BMP3基因构建于PcDNA3表达载体,脂质体介导法
【机 构】
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西安第四军医大学西京医院骨科研究所重庆第三军医大学西南医院骨科;
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目的通过基因转染方法,使成纤维细胞NIH-3T3细胞具有合成及分泌骨形态发生蛋白(BMP)、体内诱导新骨生成的能力.方法定向克隆法将BMP3基因构建于PcDNA3表达载体,脂质体介导法转染NIH-3T3细胞,G418筛选获得稳定转化体,Northern印迹法检测转染细胞有无BMP3基因表达,免疫组织化学检测转染细胞内的BMP3蛋白合成,钙钴法染色不同时相的转染细胞碱性磷酸酶并作图像分析.将转染细胞注入裸鼠肌袋,观察注射后第4周诱导新骨生成情况.结果转染细胞体外培养6周Northern印迹法检测到有明显的BMP3基因表达,免疫组织化学染色见转染细胞培养筛选5～8周后细胞浆内有染成黄色的BMP3蛋白质颗粒出现,图像分析蛋白质生成在转染后第6周达高峰.钙钴法碱性磷酸酶染色及图像分析示转染细胞内碱性磷酸酶明显高于同期对照组,两组间有显著性差异(P＜0.01).被转染NIH-3T3细胞裸鼠肌袋诱导成骨实验见注射后4周注射部位有大量软骨细胞出现,并伴有骨小梁生成.结论通过基因转染方法可以使NIH-3T3细胞具有合成及分泌内源性BMP的能力,合成及分泌的BMP具有良好的生物活性,肌袋实验具有诱导成骨作用.但是,由于基因治疗的某些不可控性因素,其安全性仍有待于进一步研究.
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