‘库尔勒香梨’是新疆重点发展的特色果树品种之一，具有自交不亲和性。本研究以新疆轮台国家果树资源圃栽培梨品种‘库尔勒香梨’为试材，利用梨 S 基因的保守序列设计合成的引物：‘FTQQYQ’/ ‘anti-IIWPNV’ 初步确定‘库尔勒香梨’S-RNase 等位基因型后，设计等位基因特异性引物，利用 RT-PCR 克隆两个花柱 S-RNase 等位基因 c DNA 片段，RACE(c DNA 末端快速扩增)技术进行 c DNA 全长克隆，采用BLAST 进行序列比对，Protparam 等在线软件分析两个 S-RNase 等位基因的编码蛋白特性。根据 NCBI 上已登录的 63 条梨属 S-RNase 基因的全长序列，用 DNAMAN 软件对其氨基酸序列进行比对并用 MEGA 4.0构 建 进 化 树 。 本 试 验 从 ‘ 库 尔 勒 香 梨 ’ 中 克 隆 得 到 了 S22-RNase(Gen Bank 接 受 号 ： KX214125)/ S28-RNase(Gen Bank 接受号：KX214124)等位基因 c DNA 的全长序列，为分子手段调控梨自交不亲和性状奠定了基础。S22-RNase 基因 c DNA 全长 904 bp，ORF(开放阅读框)长 684 bp，编码 227 个氨基酸；S28-RNase 基因 c DNA 全长 921 bp，ORF 长 687 bp，编码 228 个氨基酸。BLASTP 比对显示，这两个基因都具有保守的 RNase-T2 基因结构，属于 RNase-T2 家族。预测相对分子质量分别为 25.6 k Da 和 25.9 k Da，等电点 9.36 和 9.30，都属于亲水性蛋白。进化分析表明，‘库尔勒香梨’的 S22-RNase 和 S28-RNase 处在不同的两个分支上，表明两基因亲缘关系较远。