【摘 要】
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目的:构建小鼠 noggin 基因的重组腺病毒载体并鉴定。方法:采用基因工程技术。经过2次亚克隆将 noggin 基因片段克隆至穿梭质粒 AdTrack-CMV 上,利用 pAdEasy-1系统进行细菌内
【机 构】
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目的:构建小鼠 noggin 基因的重组腺病毒载体并鉴定。方法:采用基因工程技术。经过2次亚克隆将 noggin 基因片段克隆至穿梭质粒 AdTrack-CMV 上,利用 pAdEasy-1系统进行细菌内同源重组后,脂质体转染 293T 细胞包装、扩增。采用 PCR 方法对重组体腺病毒进行鉴定,利用穿梭质粒中带有绿色荧光蛋白 GFP 报告基因,对病毒滴度和感染效率进行监测。结果:酶切鉴定及 PCR 结果证明 noggin 基因重组腺病毒载体构建成功,病毒滴度达6.3×10~(10)pfu/ml。结论:应用细菌内同源重组法成功构建了含小鼠 noggin 基因的重组腺病毒载体。
Objective: To construct the recombinant adenovirus vector of mouse noggin gene and identify it. Methods: Using genetic engineering techniques. After 2 subclones, the noggin gene fragment was cloned into the shuttle plasmid AdTrack-CMV. After homologous recombination in bacteria was carried out by using the pAdEasy-1 system, the 293T cells were transfected with the liposome and amplified. The recombinant adenovirus was identified by PCR, and the green fluorescent protein GFP reporter gene was used in the shuttle plasmid to monitor the virus titer and infection efficiency. Results: The results of restriction enzyme digestion and PCR proved that the recombinant adenovirus vector of noggin gene was successfully constructed with the titer of 6.3 × 10 ~ (10) pfu / ml. Conclusion: Recombinant adenovirus vector containing mouse noggin gene was successfully constructed by homologous recombination in bacteria.
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