【摘 要】
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目的:通过TNF-α诱导兔泪腺损伤建立干眼细胞模型,观察养阴润目丸对干眼兔泪腺细胞存活、凋亡和炎症因子分泌的影响,以及调控TNF-α/P38MAPK/P53通路的作用,探讨养阴润目丸对干眼兔泪腺细胞的保护作用及其机制.方法:原代分离培养泪腺细胞,并分为Con组、TNF-α组、Positive组和YYRM组.制备杞菊地黄丸、养阴润目丸的含药血清和无含药血清,给予相应干预后,采用MTT法检测各组细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,ELISA法检测炎症因子(IL-1β、IL-6)的分泌水平,Western B
【机 构】
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湖南中医药大学第一附属医院,中医药防治眼耳鼻咽喉疾病湖南省重点实验室,湖南省中医药防治眼耳鼻咽喉疾病与视功能保护工程技术研究中心,长沙410007;湖南中医药大学,长沙410208
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目的:通过TNF-α诱导兔泪腺损伤建立干眼细胞模型,观察养阴润目丸对干眼兔泪腺细胞存活、凋亡和炎症因子分泌的影响,以及调控TNF-α/P38MAPK/P53通路的作用,探讨养阴润目丸对干眼兔泪腺细胞的保护作用及其机制.方法:原代分离培养泪腺细胞,并分为Con组、TNF-α组、Positive组和YYRM组.制备杞菊地黄丸、养阴润目丸的含药血清和无含药血清,给予相应干预后,采用MTT法检测各组细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,ELISA法检测炎症因子(IL-1β、IL-6)的分泌水平,Western Blot法检测细胞中TNF-α、P38MAPK、P53蛋白的表达情况.结果:与Con组比较,TNF-α组泪腺细胞存活率显著下降(P＜0.05),细胞凋亡率显著升高(P＜0.05),炎症因子IL-13和IL-6分泌显著增多(P＜0.05);与TNF-α组比较,Positive组和YYRM组细胞存活率显著升高(P＜0.05),细胞凋亡率降低(P＜0.05),炎症因子IL-1β和IL-6分泌显著减少(P＜0.05).TNF-α诱导后激活了TNF-α/P38MAPK/P53通路的关键蛋白表达,而养阴润目丸能抑制该系列的关键蛋白表达,且与杞菊地黄丸效果相近.结论:干眼的发病可能与激活TNF-α/P38MAPK/P53通路有关,养阴润目丸可下调TNF-α、P38MAPK和P53蛋白表达,从而减少炎症因子分泌,抑制其凋亡率,改善其存活率,提示养阴润目丸可能通过抑制TNF-α激活的TNF-αα/P38MAPK/P53信号通路治疗干眼.
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