【摘 要】
：
目的:克隆人T-bet基因,构建其真核表达载体pEGFP-C1-T-bet.方法:实验于2005-07/2006-07在北京大学深圳医院中心实验室完成.①根据Genebank的人T-bet基因的全长cDNA序列,设计
【机 构】
：
北京大学深圳医院肝胆腔镜外科,广州中医药大学基础医学院,中山大学中山医学院
论文部分内容阅读
目的:克隆人T-bet基因,构建其真核表达载体pEGFP-C1-T-bet.方法:实验于2005-07/2006-07在北京大学深圳医院中心实验室完成.①根据Genebank的人T-bet基因的全长cDNA序列,设计合成一对附加BglⅡ和SalⅠ两个限制性内切酶酶切位点的特异性引物.②分离人外周血单个核细胞,提取RNA,用反转录-聚合酶链反应方法将T-bet的编码序列cDNA扩增,装入pMD18-T载体并送去测序.③BglⅡ+SalⅠ双酶切质粒pMD18-T-bet,经琼脂糖电泳切胶回收T-bet片段,将T-bet插入载体pEGFP-C1构建成重组真核表达载体pEGFP-C1-T-bet.④用双酶切和聚合酶链反应对插入片段进行分析和验证.结果:①反转录-聚合酶链反应产物经琼脂糖电泳结果显示在预期位置有相对分子质量为1 608 bp的特异性扩增带.②测序结果证实,T-bet的编码序列和Genbank中T-bet mRNA序列相同.③双酶切和聚合酶链反应结果证实插入片段序列正确.结论:实验成功扩增出人T-bet基因,构建了基因重组真核表达载体pEGFP-C1-T-bet,为探索T-bet基因对免疫细胞的调节作用和肿瘤基因治疗奠定了基础.
其他文献
目的 探讨单纯吸烟法建立大鼠慢性支气管炎模型的可行性,通过观察支气管超微结构的改变,讨论氨溴索对慢性支气管炎大鼠模型的影响.方法 实验大鼠随机分为3组:健康对照组,支气
目的探讨犬心房颤动(房颤)时T型钙通道在心房电重塑中的作用及机制。方法将2002年2月至2006年10月北京大学人民医院动物实验的杂种犬15条,分为3组,每组5条,分别为正常对照组
目的 探讨细胞间粘附分子-1(ICAM-1)的反义寡核苷酸(ICAM-1-ASO)在小鼠心脏移植中对ICAM-1表达以及在排斥反应中的作用.方法 以BALB/c小鼠为供者,C57小鼠为受者,建立颈部异位
Na+/H-交换泵(NHE)为参与细胞内外Na+/H-交换的细胞膜大分子.已证实有6种形式的NHE,分别命名为NHE1～NHE6,其中以NHE-1组织分布最广泛.
目的 用高通量的组织芯片技术,分析人正常肝组织、癌旁肝组织及肝癌组织中Tec的表达及磷酸化水平,探讨其表达差异的意义.方法 用组织芯片技术结合免疫组织化学法检测肝癌组织
多种病理机制和病变类型参与了血管性痴呆患者的认知障碍.临床上已经采用多种药物治疗血管性痴呆患者,包括胆碱酯酶抑制剂、N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂、钙通道阻滞剂和神
目的探讨胰腺癌组织中 Hedgehog 信号通路成员 GLI1 mRNA 的表达情况及其临床意义。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测25例胰腺癌组织及其相应近癌旁组织、癌旁正常组
目的 描述伴脉络膜脱离的孔源性视网膜脱离患者的自发性脉络膜上腔出血的一些临床特征,探讨其发生的高危因素,及其在视网膜复位手术中的特征和预后.方法 在879例孔源性视网膜
肝静脉闭塞症(HVOD)是造血干细胞移植(HSCT)后一种严重且危险的并发症,一般表现为移植后3周内即出现黄疸、肝肿大、肝区疼痛、腹腔积液及液体潴留和不明原因的体重增加.
文章探讨在网络化环境下图书馆信息咨询服务体系的运作格局和新特征,强调加强数字化信息咨询服务是我国高校图书馆面临的紧迫课题.