【摘 要】
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大熊猫(Ailuropoda melanoleuca)的妊娠诊断是其繁殖过程中极其重要的环节,通过酶联免疫测定法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测大熊猫尿液中与妊娠相关的激素是准确判断是否受孕的一种非损伤性检测方式.辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase,HRP)是ELISA试剂盒显色体系的主要成分之一,其与抗原或者抗体结合可以形成酶标抗原或酶标抗体从而应用于ELISA试剂盒中.本试验旨在合成可用于孕酮(Progesterone,P
【机 构】
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秦岭大熊猫研究中心,陕西周至710402;西北农林科技大学
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大熊猫(Ailuropoda melanoleuca)的妊娠诊断是其繁殖过程中极其重要的环节,通过酶联免疫测定法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测大熊猫尿液中与妊娠相关的激素是准确判断是否受孕的一种非损伤性检测方式.辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase,HRP)是ELISA试剂盒显色体系的主要成分之一,其与抗原或者抗体结合可以形成酶标抗原或酶标抗体从而应用于ELISA试剂盒中.本试验旨在合成可用于孕酮(Progesterone,P4)检测的ELISA试剂盒的HRP酶标的P4-HRP偶联物.通过两步法合成,首先对11α-羟基孕酮(11α-hydroxyproges-terone,11α-OH-P4)进行化学修饰,在4-二甲氨基吡啶(4-Dimethylaminopyridine,DMAP)的催化作用下,与琥珀酸酐偶联形成11α-羟基孕酮半琥珀酸酯(11α-hydroxyprogesterone hemisuccinate,11α-OH-P4-HS),后通过碳化二亚胺法,使11α-OH-P4-HS与HRP偶联形成酶标抗原P4-HRP偶联物.通过鉴定,该两步试验制备了产率为78.64％ 的11α-O H-P4-H S,以及酶标记率为22.9％ 的P4-H R P.本研究最终成功合成酶标记的孕酮,可用于后续开发检测试剂盒.
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