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摘 要 为探究外源激素对苦丁茶冬青扦插生根的影响，以苦丁茶冬青当年生半木质化的枝条作为扦插材料，分别浸泡在一定浓度的生长素（IAA）、吲哚丁酸（IBA）和萘乙酸（NAA）中2 h，以清水为对照，分析不同处理条件下插穗韧皮部营养物质含量和相关酶活性变化，并统计各处理的生根时间和生根率。结果表明：IBA和NAA处理能提高插穗超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化物酶（POD）活性，插穗整个生根过程中可溶性蛋白含量呈先下降后上升趋势，其中NAA处理又显著提高可溶性糖含量，从而使生根时间缩短至49.25 d，生根率达71.43%，同时显著增加单插穗生根数，可在生产中应用推广。
关键词 外源激素;苦丁茶冬青;插穗;生根
中图分类号：S571.1 文献标志码：A DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2021.11.001
苦丁茶冬青为冬青属常绿乔木，其叶芽经加工后可作为饮料，口感独特，具有生津止渴、消食提神、清火解毒、降压减肥等多种药理功效，是华南地区的传统产品和特产，作为茶药两用作物至今已有2 000多年的生产和饮用历史，被誉为“绿色黄金”，产品在国内外市场上很受欢迎，其产业在推动农业产业调整、促进农民增收和乡村振兴过程中发挥着重要作用[1-2]。
然而，随着苦丁茶产业的快速发展，海南等地区种苗供应不足，一定程度上影响了产业规模，究其原因为无性繁育成活率难以突破，主要表现在种苗扦插繁育的生根率与移栽成活率均较低。外源激素用于苦丁茶冬青扦插繁育有一定研究基础[3]，但大都集中在繁育技术方面，关于外源激素影响其扦插生根的机理尚未见报道。基于此，通过研究分析不同激素处理对插穗生根、物质积累和相关酶活性影响，以期揭示外源激素影响插穗生根的机理，为优化苦丁茶冬青无性繁育技术提供理论支持。
1 材料与方法
1.1 材料
用于制作插穗的苦丁茶冬青枝条取自中国热带农业科学院香料饮料研究所试验基地成龄植株，选用当年半木质化的枝条作为插条。
1.2 方法
1.2.1 插条处理
选取直径4 mm以上的枝条，根据实际将插条剪成长度8～10 cm的插穗，每个插穗在上端剪口附近保留1～2片叶，每片叶减去1/2～2/3的面积并保留叶柄，每30支插穗扎绑为一小捆待用。
1.2.2 插穗处理
将插穗分别用200 mL·L-1的IAA（T1）、IBA（T2）和NAA（T3）浸泡插穗基部处5 cm以上，处理时间2 h，以清水为对照（CK）。每个处理1捆插穗，共设3次重复，采用单因素完全随机排列[4]。
1.2.3 扦插管理
选择用河砂作为基质的苗床，苗床上方用遮光度为75%的遮阴网遮光，扦插前2～3 d用50%多菌灵可湿性粉剂800倍喷淋消毒;扦插株行距6 cm×8 cm，扦插后每个苗床淋水12 L，用薄膜覆盖保水，之后隔天浇等量水，保持苗床湿润。
1.2.4 取样与测定
扦插后每10 d取插穗基部2 cm内韧皮部测定营养物质和相关酶活性。可溶性蛋白质含量测定用考马斯亮蓝G-250比色法，可溶性糖含量测定采用硫酸-蒽酮比色法[5]，SOD活性测定采用氮蓝四唑法，POD活性测定采用愈创木酚法。40 d起，隔天观察记录生根情况;扦插后第65 d统计各处理插条的生根率、生根数和根长。
1.2.5 数据处理与统计方法
采用Excel处理实验数据与图表，采用SPSS 20.0进行显著性分析。
2 结果与分析
2.1 不同外源激素对苦丁茶冬青插穗生根的影响
3种外源激素对生根的影响见表1，各激素处理都显著缩短了插穗生根时间，T3处理平均生根时间可缩短至49.25 d;T1、T2、T3处理生根时间比对照分别缩短了
3.75 d、6.00 d和8.75 d。扦插后第65 d的生根率以T3处理为最高，达71.43%，T2和T3处理分别比对照提高19.17和25.14个百分点;单个插穗的根数以T2和T3处理为多，高于对照和T1处理;而此时的平均根长在2.98～3.41 cm，各处理都小于对照，但差异不显著。
2.2 不同外源激素对插穗营养物质变化的影响
2.2.1 對可溶性蛋白含量的影响
如图1所示，对照和T1处理插穗可溶性蛋白含量在扦插后总体呈下降趋势，仅在扦插后50 d有稍许增加;T2和T3处理条件下可溶性蛋白含量呈先下降后上升趋势。在20 d，T1、T3处理显著高于对照;在第30～40 d，T3处理又显著低于T1、T2处理;在生根后期，T2、T3处理显著高于对照和T1处理。
2.2.2 对可溶性糖含量的影响
在扦插后10～20 d，各插穗可溶性糖含量都保持在9.54～10.54 mg·g-1 FW（见图2），各处理之间差异不显著，之后呈上升→下降→上升→下降趋势;在30 d以后的各个时期，T3处理都显著高于其他处理和对照;在40 d和50 d，T1处理可溶性糖显著低于其他处理和对照。
2.3 不同外源激素对插穗关键酶活性的影响
2.3.1 对插穗SOD酶活性的影响
由图3可知，对照在扦插后40 d插穗SOD酶活性最高，而各种激素处理在扦插后30 d活性最高，之后随扦插时间延长略有下降，但幅度不大，基本保持在183.89个活性单位左右;T3处理在酶活性高峰期（30 d）显著高于其他处理，比对照最高值（40 d）提高51.51%。除了第10 d、第20 d和第40 d，T1、T2处理的SOD活性都显著高于对照，扦插10 d以后各时期T3处理都显著高于对照。
2.3.2 对插穗POD酶活性的影响 如图4所示，T3处理条件下POD酶活性伴随扦插时间的推移呈先上升，后下降，再上升的趋势，其他处理条件下酶活性呈先上升后下降趋势。在扦插20 d和50 d以后，T3处理POD活性显著高于其他处理;除扦插后第30～40 d，其余时期T1、T2处理POD酶活性也显著高于对照。
3 结论与讨论
本研究采用3种外源激素浸泡插穗，分析各处理对苦丁茶冬青插穗生根的影响及相关生理机制。结果表明，IAA、IBA和NAA处理都显著缩短了生根时间并显著提高了装袋前的生根率，以NAA处理最优，平均生根时间缩短至49.25 d，生根率高达71.43%;IBA和NAA处理单插穗根数也高于对照和T1处理，说明IBA和NAA可用于扦插繁育，结果与前人研究一致[6-9]。
蛋白质和碳水化合物在插穗生根和根系生长过程中不可或缺，他们为插穗提供能源的同时又能显著促进不定根的发生和生长[10]。研究表明，对照和IAA处理插穗可溶性蛋白含量总体呈下降趋势，仅在扦插后50 d有稍许增加;IBA和NAA处理条件下可溶性蛋白含量呈先下降后上升趋势;蛋白质前期的减少证明生根过程需要大量物质和能量，而IBA和NAA处理在生根后期又能提高蛋白质含量，可推测两种处理一定程度上增强了插穗的光合能力，使得光合产物增多进而表现为蛋白质含量增加。NAA处理可溶性糖在30 d出现峰值，而且之后显著高于其他对照和处理，说明NAA处理促进了插穗呼吸作用和淀粉降解。
相关酶也参与插穗生根过程，且作用明显，其中SOD和POD是植物插穗形成愈伤组织能力的重要标志[11]，能促进植物组织中的碳水化合物转化，加速其木质化进程[12]。研究发现，IBA和NAA处理一定程度上提高了SOD和POD活性，表明这两种处理能促进新陈代谢，进而正向影响愈伤组织及根的形成。
综上，一定浓度的NAA浸穗可促进插穗呼吸作用、淀粉降解和光合能力的恢复，并且能在一定程度上提高SOD和POD活性，进而缩短生根时间，提高生根率和单插穗根数，在生产上可应用推广。
参考文献：
[1] 赵青云，王辉，王华，等.不同微量元素对苦丁茶冬青新梢的影响[J].热带农业科学，2013，33（11）：9-11.
[2] 刘国民，李娟玲，陈榆，等.我国苦丁茶冬青种质资源的形态学研究Ⅰ.茎叶的形态学研究[J].贵州科学，2004（03）：9-23.
[3] 顾文亮，庄辉发，王辉，等.苦丁茶冬青扦插繁育技术研究[J].热带农业科学，2018，38（04）：31-35.
[4] 零汉明.苦丁茶及其栽培技术探讨[J].林业科学，2016（30）：146-148.
[5] 赵秋芳，陈娅萍，顾文亮，等.香草兰花芽分化期蛋白质及碳水化合物变化研究[J].热带作物学报，2015，36（06）：1053-1058.
[6] 杨林，朱莉，孙奂明，等.直立迷迭香不同木质化程度插条扦插效果研究[J].北方园艺，2010（05）：114-115.
[7] 王关林，苏冬霞，吴海东.代谢调节剂对嫩枝扦插繁殖成活率的影响及其机理[J].园艺学报，2006（02）：395-398.
[8] 张晓平，方炎明.杂种鹅掌楸不同季节扦插特征比较[J].浙江林学院学报，2003，20（03）：249-253.
[9] 刘玉艳，于凤鸣，于娟.IBA对含笑扦插生根影响初探[J].河北农业大学学报，2003（02）：25-29.
[10] 郭素娟，凌宏勤，李凤兰.白皮松插穗生根的生理生化基础研究[J].北京林业大学学报，2004（02）：43-47.
[11] 宋丽红，曹帮华.光叶楮扦插生根的吲哚乙酸氧化酶、多酚氧化酶、过氧化物酶活性变化研究[J].武汉植物学研究，2005（04）：347-350.
[12] 扈紅军，曹帮华，尹伟伦，等.榛子嫩枝扦插生根相关氧化酶活性变化及繁殖技术[J].林业科学，2008（06）：60-65.
（责任编辑：赵中正）
关键词 外源激素;苦丁茶冬青;插穗;生根
中图分类号：S571.1 文献标志码：A DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2021.11.001
苦丁茶冬青为冬青属常绿乔木，其叶芽经加工后可作为饮料，口感独特，具有生津止渴、消食提神、清火解毒、降压减肥等多种药理功效，是华南地区的传统产品和特产，作为茶药两用作物至今已有2 000多年的生产和饮用历史，被誉为“绿色黄金”，产品在国内外市场上很受欢迎，其产业在推动农业产业调整、促进农民增收和乡村振兴过程中发挥着重要作用[1-2]。
然而，随着苦丁茶产业的快速发展，海南等地区种苗供应不足，一定程度上影响了产业规模，究其原因为无性繁育成活率难以突破，主要表现在种苗扦插繁育的生根率与移栽成活率均较低。外源激素用于苦丁茶冬青扦插繁育有一定研究基础[3]，但大都集中在繁育技术方面，关于外源激素影响其扦插生根的机理尚未见报道。基于此，通过研究分析不同激素处理对插穗生根、物质积累和相关酶活性影响，以期揭示外源激素影响插穗生根的机理，为优化苦丁茶冬青无性繁育技术提供理论支持。
1 材料与方法
1.1 材料
用于制作插穗的苦丁茶冬青枝条取自中国热带农业科学院香料饮料研究所试验基地成龄植株，选用当年半木质化的枝条作为插条。
1.2 方法
1.2.1 插条处理
选取直径4 mm以上的枝条，根据实际将插条剪成长度8～10 cm的插穗，每个插穗在上端剪口附近保留1～2片叶，每片叶减去1/2～2/3的面积并保留叶柄，每30支插穗扎绑为一小捆待用。
1.2.2 插穗处理
将插穗分别用200 mL·L-1的IAA（T1）、IBA（T2）和NAA（T3）浸泡插穗基部处5 cm以上，处理时间2 h，以清水为对照（CK）。每个处理1捆插穗，共设3次重复，采用单因素完全随机排列[4]。
1.2.3 扦插管理
选择用河砂作为基质的苗床，苗床上方用遮光度为75%的遮阴网遮光，扦插前2～3 d用50%多菌灵可湿性粉剂800倍喷淋消毒;扦插株行距6 cm×8 cm，扦插后每个苗床淋水12 L，用薄膜覆盖保水，之后隔天浇等量水，保持苗床湿润。
1.2.4 取样与测定
扦插后每10 d取插穗基部2 cm内韧皮部测定营养物质和相关酶活性。可溶性蛋白质含量测定用考马斯亮蓝G-250比色法，可溶性糖含量测定采用硫酸-蒽酮比色法[5]，SOD活性测定采用氮蓝四唑法，POD活性测定采用愈创木酚法。40 d起，隔天观察记录生根情况;扦插后第65 d统计各处理插条的生根率、生根数和根长。
1.2.5 数据处理与统计方法
采用Excel处理实验数据与图表，采用SPSS 20.0进行显著性分析。
2 结果与分析
2.1 不同外源激素对苦丁茶冬青插穗生根的影响
3种外源激素对生根的影响见表1，各激素处理都显著缩短了插穗生根时间，T3处理平均生根时间可缩短至49.25 d;T1、T2、T3处理生根时间比对照分别缩短了
3.75 d、6.00 d和8.75 d。扦插后第65 d的生根率以T3处理为最高，达71.43%，T2和T3处理分别比对照提高19.17和25.14个百分点;单个插穗的根数以T2和T3处理为多，高于对照和T1处理;而此时的平均根长在2.98～3.41 cm，各处理都小于对照，但差异不显著。
2.2 不同外源激素对插穗营养物质变化的影响
2.2.1 對可溶性蛋白含量的影响
如图1所示，对照和T1处理插穗可溶性蛋白含量在扦插后总体呈下降趋势，仅在扦插后50 d有稍许增加;T2和T3处理条件下可溶性蛋白含量呈先下降后上升趋势。在20 d，T1、T3处理显著高于对照;在第30～40 d，T3处理又显著低于T1、T2处理;在生根后期，T2、T3处理显著高于对照和T1处理。
2.2.2 对可溶性糖含量的影响
在扦插后10～20 d，各插穗可溶性糖含量都保持在9.54～10.54 mg·g-1 FW（见图2），各处理之间差异不显著，之后呈上升→下降→上升→下降趋势;在30 d以后的各个时期，T3处理都显著高于其他处理和对照;在40 d和50 d，T1处理可溶性糖显著低于其他处理和对照。
2.3 不同外源激素对插穗关键酶活性的影响
2.3.1 对插穗SOD酶活性的影响
由图3可知，对照在扦插后40 d插穗SOD酶活性最高，而各种激素处理在扦插后30 d活性最高，之后随扦插时间延长略有下降，但幅度不大，基本保持在183.89个活性单位左右;T3处理在酶活性高峰期（30 d）显著高于其他处理，比对照最高值（40 d）提高51.51%。除了第10 d、第20 d和第40 d，T1、T2处理的SOD活性都显著高于对照，扦插10 d以后各时期T3处理都显著高于对照。
2.3.2 对插穗POD酶活性的影响 如图4所示，T3处理条件下POD酶活性伴随扦插时间的推移呈先上升，后下降，再上升的趋势，其他处理条件下酶活性呈先上升后下降趋势。在扦插20 d和50 d以后，T3处理POD活性显著高于其他处理;除扦插后第30～40 d，其余时期T1、T2处理POD酶活性也显著高于对照。
3 结论与讨论
本研究采用3种外源激素浸泡插穗，分析各处理对苦丁茶冬青插穗生根的影响及相关生理机制。结果表明，IAA、IBA和NAA处理都显著缩短了生根时间并显著提高了装袋前的生根率，以NAA处理最优，平均生根时间缩短至49.25 d，生根率高达71.43%;IBA和NAA处理单插穗根数也高于对照和T1处理，说明IBA和NAA可用于扦插繁育，结果与前人研究一致[6-9]。
蛋白质和碳水化合物在插穗生根和根系生长过程中不可或缺，他们为插穗提供能源的同时又能显著促进不定根的发生和生长[10]。研究表明，对照和IAA处理插穗可溶性蛋白含量总体呈下降趋势，仅在扦插后50 d有稍许增加;IBA和NAA处理条件下可溶性蛋白含量呈先下降后上升趋势;蛋白质前期的减少证明生根过程需要大量物质和能量，而IBA和NAA处理在生根后期又能提高蛋白质含量，可推测两种处理一定程度上增强了插穗的光合能力，使得光合产物增多进而表现为蛋白质含量增加。NAA处理可溶性糖在30 d出现峰值，而且之后显著高于其他对照和处理，说明NAA处理促进了插穗呼吸作用和淀粉降解。
相关酶也参与插穗生根过程，且作用明显，其中SOD和POD是植物插穗形成愈伤组织能力的重要标志[11]，能促进植物组织中的碳水化合物转化，加速其木质化进程[12]。研究发现，IBA和NAA处理一定程度上提高了SOD和POD活性，表明这两种处理能促进新陈代谢，进而正向影响愈伤组织及根的形成。
综上，一定浓度的NAA浸穗可促进插穗呼吸作用、淀粉降解和光合能力的恢复，并且能在一定程度上提高SOD和POD活性，进而缩短生根时间，提高生根率和单插穗根数，在生产上可应用推广。
参考文献：
[1] 赵青云，王辉，王华，等.不同微量元素对苦丁茶冬青新梢的影响[J].热带农业科学，2013，33（11）：9-11.
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[5] 赵秋芳，陈娅萍，顾文亮，等.香草兰花芽分化期蛋白质及碳水化合物变化研究[J].热带作物学报，2015，36（06）：1053-1058.
[6] 杨林，朱莉，孙奂明，等.直立迷迭香不同木质化程度插条扦插效果研究[J].北方园艺，2010（05）：114-115.
[7] 王关林，苏冬霞，吴海东.代谢调节剂对嫩枝扦插繁殖成活率的影响及其机理[J].园艺学报，2006（02）：395-398.
[8] 张晓平，方炎明.杂种鹅掌楸不同季节扦插特征比较[J].浙江林学院学报，2003，20（03）：249-253.
[9] 刘玉艳，于凤鸣，于娟.IBA对含笑扦插生根影响初探[J].河北农业大学学报，2003（02）：25-29.
[10] 郭素娟，凌宏勤，李凤兰.白皮松插穗生根的生理生化基础研究[J].北京林业大学学报，2004（02）：43-47.
[11] 宋丽红，曹帮华.光叶楮扦插生根的吲哚乙酸氧化酶、多酚氧化酶、过氧化物酶活性变化研究[J].武汉植物学研究，2005（04）：347-350.
[12] 扈紅军，曹帮华，尹伟伦，等.榛子嫩枝扦插生根相关氧化酶活性变化及繁殖技术[J].林业科学，2008（06）：60-65.
（责任编辑：赵中正）