【摘 要】
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目的 比较2种神经干细胞(NSCs)颅内移植方法对宿主脑损伤和移植物维系的影响.方法 体外原代培养NSCs并用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)标记,将NSCs单细胞悬液(5×105个,5 μL)定
【机 构】
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第三军医大学大坪医院神经外科,北京军区总医院附属八一脑科医院,首都医科大学附属复兴医院神经内科
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目的 比较2种神经干细胞(NSCs)颅内移植方法对宿主脑损伤和移植物维系的影响.方法 体外原代培养NSCs并用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)标记,将NSCs单细胞悬液(5×105个,5 μL)定向注射到42只健康成年C57BL/6小鼠两侧大脑运动皮层内,左侧颅骨采用磨钻钻孔,右侧采用微量进样器钻孔.移植后1d、2d、3d、7d、14 d、21d和28 d采用随机数字表法各选取6只小鼠处死,观察脑大体标本,HE染色观察脑移植区的损伤,免疫荧光双重标记染色Brdu/神经元核抗原(NeuN)、Brdu/神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)分析脑移植区NSCs、神经元和星形胶质细胞的分布情况.结果 (1)与微量进样器钻孔侧相比,磨钻钻孔侧脑组织结构破坏较严重,移植后1～3 d神经细胞坏死明显,并伴有大量红细胞外溢及炎症细胞浸润,7d时可见瘢痕组织形成,直到28d仍可见较多瘢痕组织聚集在移植区.(2)移植后1～3 d Brdu标记的NSCs分布较为集中,7～21 d可见NSCs明显迁移并分化为神经元和星形胶质细胞,左侧脑移植区可见大量星形胶质细胞,而神经元分布较少,右侧则相反;(3)与左侧比较,右侧脑移植区各时间点Brdu、NeuN阳性细胞百分率较高,GFAP阳性细胞百分率较低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 采用微量进样器钻孔较磨钻钻孔能有效减轻移植损伤,明显提高NSCs存活率,有利于神经元生长,并减少胶质瘢痕形成.
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