【摘 要】
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目的 研究幽门螺杆菌(HP)毒素相关蛋白A(CagA)对胃泌素基因启动子(GP)的调控作用及其信号传导机制,进一步阐明胃癌发生、发展的相关机制.方法 采用双酶切、聚合酶链反应(PCR)
【机 构】
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贵阳医学院分子生物学重点实验室,贵阳医学院附属医院
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目的 研究幽门螺杆菌(HP)毒素相关蛋白A(CagA)对胃泌素基因启动子(GP)的调控作用及其信号传导机制,进一步阐明胃癌发生、发展的相关机制.方法 采用双酶切、聚合酶链反应(PCR)和测序技术,鉴定CagA表达载体pcDNA3.1ZEO(-)/CagA和胃泌素报告基因载体PGL/GP.采用pcDNA3.1ZEO(一)/CagA+PGL/GP瞬时共转染AGS和SGC-7901细胞,同时用PGL/GP转染AGS和SGC-7901细胞,36 h后用HP感染细胞.在感染与转染细胞的同时,加入JAK2信号通路抑制剂AG490和ERK信号通路抑制剂U0126.以未经处理的胃癌细胞和转染空载体的细胞为对照,通过检测荧光素酶活性,测定转染和感染细胞中GP转录活性的改变.TaqMan(R)实时荧光定量PCR测定胃泌素mRNA的表达.结果 与对照组、pcDNA 3.1 ZEO(-)/CagA+PGL3/Basic共转染组和pcDNA3.1ZEO(-)+PGL/GP共转染组相比,pcDNA3.1ZEO(-)/CagA+PGL/GP共转染组的萤光素酶活性在AGS细胞分别升高到251.3倍、106.1倍和2.4倍,在SGC-7901细胞分别升高到35.8倍、22.7倍和13.4倍(P
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