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为探究鼠李糖乳杆菌发酵灵芝子实体粉的主要活性物质变化及对肝癌细胞HepG2的抑制作用，采用固体发酵的方式，以鼠李糖乳杆菌为发酵菌种，灵芝子实体粉为发酵基质，制备发酵灵芝粉，研究其主要活性成分及抗氧化能力。对灵芝子实体粉进行植物代谢组学测定，通过扫描电镜观察其表面结构的变化。采用CCK-8法检测灵芝醇提物对肝癌细胞的抑制作用；细胞划痕的方法检测灵芝醇提物对肝癌细胞迁移的影响；Hoechst 33258检测灵芝醇提物对细胞核的影响，验证凋亡效果；PCR法分析HepG2细胞凋亡相关基因的表达。结果表明，鼠李糖乳杆菌发酵灵芝粉的三萜类物质含量为4.075mg/g、多糖含量为2.347 g/100 g、黄酮含量为4.604 mg/g与发酵前相比均提高；鼠李糖乳杆菌发酵灵芝粉抗氧化能力较原灵芝粉和发酵对照灵芝粉显著提高；植物代谢组学的结果显示，3种样品的物质成分和峰面积均有显著差异。细胞试验结果显示，发酵灵芝醇提物抑制HepG2细胞增长和阻滞细胞迁移能力明显增加，且Hoechst 33258结果凋亡现象更加显著。通过PCR试验验证发酵灵芝醇提物干预细胞使得促进细胞凋亡相关基因Bax、Cyclin-A、CDK-2、P21、P53显著上调，抑制细胞凋亡相关基因Bcl-2显著下调。结论：鼠李糖乳杆菌发酵灵芝可提高灵芝主要活性物质，如灵芝三萜类化合物、灵芝多糖、黄酮的含量，发酵灵芝醇提物对HepG2细胞的抑制作用更强。