【摘 要】
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目的观察高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein box 1,HMGB1)介导肾小管上皮细胞功能的变化并探讨其机制。方法体外培养大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E),分为空白对照组、HMGB1刺激组以及HMGB1+红假单胞菌脂多糖(Lipopolysaccharide from Rhodobactersphaeroides,LPS RS)刺激组,采用免疫荧光及Wes
【机 构】
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目的观察高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein box 1,HMGB1)介导肾小管上皮细胞功能的变化并探讨其机制。
方法体外培养大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E),分为空白对照组、HMGB1刺激组以及HMGB1+红假单胞菌脂多糖(Lipopolysaccharide from Rhodobactersphaeroides,LPS RS)刺激组,采用免疫荧光及Western印迹检测Toll样受体4(Toll- like receptor 4,TLR4)表达,流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期变化,Western印迹检测MAPK信号通路及NF-κB激活情况,实时荧光定量PCR检测细胞IL-1、IL-6及组织金属蛋白酶2抑制因子(tissue inhibitor of metalloproteinases 2,TIMP2)mRNA表达水平,蛋白芯片检测IL-1、IL-6及TIMP2蛋白表达水平。
结果NRK52E细胞表达TLR4。与对照组比较,HMGB1刺激组细胞周期G1期阻滞率高,MAPK信号通路及NF-κB激活,IL-1、IL-6及TIMP2 mRNA及蛋白表达水平均显著升高(均P<0.05)。TLR4特异性阻断剂LPS RS可以显著抑制HMGB1所介导的效应(均P<0.05)。
结论HMGB1与NRK52E细胞上TLR4的相互作用介导肾小管上皮细胞炎性反应,主动合成并释放炎性介质。
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