论文部分内容阅读
背景与目的:水通道蛋白-5(aquaporin 5,AQP-5)在人结肠癌组织中表达增高,与结肠癌的发生、发展及转移过程有关。但AQP-5影响的信号转导通路及对结肠癌细胞的具体影响尚不明确。本研究通过抑制结肠癌细胞株HT-29内源性AQP-5的表达,探讨AQP-5对HT-29细胞丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(AKT)、细胞外调节激酶细胞外调节激酶(ERK)、c-jun氨基末端激酶(JNK)和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号转导通路的影响。方法:体外常规培养人结肠癌HT-29细胞,取对数生长期的细胞用于实验。蛋白质印迹法(Western blot)检测AQP-5-siRNA转染效率;采用噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot检测转染AQP-5 siRNA的HT-29细胞AKT、ERK、JNK和p38蛋白的磷酸化形式及总蛋白的表达水平。结果:AQP-5-siRNA转染使HT-29细胞AQP-5基因表达下调的效率达90%。MTT分析结果显示,转染了AQP-5-siRNA的HT-29细胞增殖抑制率显著增高(P<0.05),流式细胞术发现转染了AQP-5-siRNA的HT-29细胞凋亡率显著增加(P<0.05)。Western blot结果显示,与转染NS-siRNA的阴性对照组相比较,转染了AQP-5-siRNA的HT-29细胞磷酸化的AKT、ERK和JNK蛋白磷酸化形式表达量与总蛋白表达量的改变两者差异无统计学意义(P>0.05)。而转染了AQP-5-siRNA的HT-29细胞磷酸化p38与总的p38蛋白比值下降(P<0.05)。结论:针对AQP-5的si-RNA具有促进HT-29细胞凋亡、抑制细胞增殖的作用,该作用可能与抑制p38MAPK蛋白的磷酸化活化有关。