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摘 要：目的：考察目前市场上常用总胆红素试剂盒的检验方法。方法：选取5个厂家生产的试剂盒(均为重氮法)，按其说明书要求分别用带血清空白的终点法或不带血清空白的终点法检测其线性和准确性。结果：各试剂盒线性r＞0.99，准确性在1%～10%波动。结论：使用终点法测定总胆红素试剂盒，应使标准规范化。
关键词：总胆红素试剂盒；线性；准确性
人红细胞的寿命一般为120 d，红细胞死亡后变成间接胆红素（I-Bil），经肝脏转化为直接胆红素（D-Bil），组成胆汁，排入胆道，最后经大便排出。间接胆红素与直接胆红素之和就是总胆红素（T-Bil）。上述的任何一个环节出现障碍，均可使人发生溶血性黄疸、肝细胞性黄疸和阻塞性黄疸。肝炎患者的黄疸一般为肝细胞性黄疸，也就是说直接胆红素与间接胆红素均升高，而淤胆型肝炎的患者以直接胆红素升高为主。总胆红素的正常值为1.71～17.1 μmol/L(1～10 mg/L)，直接胆红素的正常值为1.71～7 μmol/L(1～4 mg/L)。因此，临床上对于用测定血清总胆红素来鉴别黄疸有较大意义，它对肝脏疾病诊断、治疗和愈后判断有重要价值。我们对总胆红素试剂盒中试剂的线性和准确性进行研究，不仅可以有效的节约原材料、降低生产成本、规范行业，对临床检验的准确性，也大有帮助。
1 仪器与试药
半自动生化分析仪（SECOMAM公司生产，型号：BASIC）；总胆红素测定试剂盒（选用五个厂家生产的，编号依次为1～5号，在这5个厂家生产的试剂盒中，只有两个试剂盒即1号试剂盒和2号试剂盒中自带标准品，其浓度分别为171 μmol/L和20 μmol/L）；总胆红素标准液（中生北控生物科技股份有限公司，批号：070032，浓度：280 μmol/L）；多项液体生化质控血清（四川省迈克科技责任有限公司，批号：0807041，浓度：24.8 μmol/L）。
2 方法
2.1 实验原理。
重氮法：总胆红素在二甲亚砜等加速剂作用下，在酸性溶液中与重氮苯磺酸作用生成紫色的偶氮胆红素，与经过同样处理的标准液比较，即可计算出样品中胆红素的含量。
2.2 试验方。法
2.2.1 线性关系取总胆红素（T-Bil）高浓度样本，通过采用样品量加倍模式（高值血清低于线性范围上限时）或用生理盐水稀释成一系列浓度，最高浓度应大于或等于标准规定线性范围上限值（5个试剂盒的加样量及加样方法详见表1~ 5），每个浓度重复测定2次，取其吸光度平均值与对应的理论浓度值进行回归分析，求相关系数r。
2.2.2 准确性取一定值血清（浓度为24.8 μmol/L的标准液），按线性项下各表中定标的加样方式和试验步骤进行测定，重复3次，取其均值计算偏差。然后按以下公式计算各样品的检测误差。
误差=( 测定值-24.81 /24.8)×100%
3 结果
3.1 线性
将试剂盒各浓度吸光度均值与其对应的理论浓度回归，计算回归系数r值，结果见表6。
3.2 准确性
检测结果如表所示。（略）
4 讨论
总胆红素标准品很不稳定，根据线性结果来看，虽然相关系数r很好，但吸光度所得值或全部升高或全部降低，即吸光度的增加与其相应的理论浓度不呈正比关系。在有些标准中要求所得值与理论值的偏差应≤10%，如按这一要求来判定线性，总胆红素的线性就远远达不到要求，所以考虑到总胆红素试剂盒这一特殊性，在标准中不但要求r值，同时还应要求所得值与理论值的偏差。
在分析方法学上，本次试验采用的是一点定标法。在做线性这一项目检测时，由于总胆红素试剂盒中说明书要求的试剂与标准液的比例较低，这就要求必须要用高浓度的标准液来定标和做线性，但如果用高浓度的标准液定标后，再做准确性时，对准确性的结果影响却非常的大。如果在试验中用高浓度的标准品定标做线性，再用低浓度的标准液定标做准确性，这样得出的结果虽好，但却也失去了检测的意义。对于很多诊断试剂来说，因为考虑到操作简便，标准曲线法基本上是一个被淘汰了的方法。
总胆红素浓度在171 μmol/L以内线性良好，高于此值时可用生理盐水将血清稀释后重测，结果乘以稀释倍数，且总胆红素在10～37℃范围内测定不受温度变化的影响，呈色在2 h内非常稳定。在实验中虽然都用的是终点法且反应原理一样，但有些带血清空白，有些又不用带血清空白。因为在试验前都是要清除试剂空白，血清空白对结果到底有怎样的影响还值得研究。
关键词：总胆红素试剂盒；线性；准确性
人红细胞的寿命一般为120 d，红细胞死亡后变成间接胆红素（I-Bil），经肝脏转化为直接胆红素（D-Bil），组成胆汁，排入胆道，最后经大便排出。间接胆红素与直接胆红素之和就是总胆红素（T-Bil）。上述的任何一个环节出现障碍，均可使人发生溶血性黄疸、肝细胞性黄疸和阻塞性黄疸。肝炎患者的黄疸一般为肝细胞性黄疸，也就是说直接胆红素与间接胆红素均升高，而淤胆型肝炎的患者以直接胆红素升高为主。总胆红素的正常值为1.71～17.1 μmol/L(1～10 mg/L)，直接胆红素的正常值为1.71～7 μmol/L(1～4 mg/L)。因此，临床上对于用测定血清总胆红素来鉴别黄疸有较大意义，它对肝脏疾病诊断、治疗和愈后判断有重要价值。我们对总胆红素试剂盒中试剂的线性和准确性进行研究，不仅可以有效的节约原材料、降低生产成本、规范行业，对临床检验的准确性，也大有帮助。
1 仪器与试药
半自动生化分析仪（SECOMAM公司生产，型号：BASIC）；总胆红素测定试剂盒（选用五个厂家生产的，编号依次为1～5号，在这5个厂家生产的试剂盒中，只有两个试剂盒即1号试剂盒和2号试剂盒中自带标准品，其浓度分别为171 μmol/L和20 μmol/L）；总胆红素标准液（中生北控生物科技股份有限公司，批号：070032，浓度：280 μmol/L）；多项液体生化质控血清（四川省迈克科技责任有限公司，批号：0807041，浓度：24.8 μmol/L）。
2 方法
2.1 实验原理。
重氮法：总胆红素在二甲亚砜等加速剂作用下，在酸性溶液中与重氮苯磺酸作用生成紫色的偶氮胆红素，与经过同样处理的标准液比较，即可计算出样品中胆红素的含量。
2.2 试验方。法
2.2.1 线性关系取总胆红素（T-Bil）高浓度样本，通过采用样品量加倍模式（高值血清低于线性范围上限时）或用生理盐水稀释成一系列浓度，最高浓度应大于或等于标准规定线性范围上限值（5个试剂盒的加样量及加样方法详见表1~ 5），每个浓度重复测定2次，取其吸光度平均值与对应的理论浓度值进行回归分析，求相关系数r。
2.2.2 准确性取一定值血清（浓度为24.8 μmol/L的标准液），按线性项下各表中定标的加样方式和试验步骤进行测定，重复3次，取其均值计算偏差。然后按以下公式计算各样品的检测误差。
误差=( 测定值-24.81 /24.8)×100%
3 结果
3.1 线性
将试剂盒各浓度吸光度均值与其对应的理论浓度回归，计算回归系数r值，结果见表6。
3.2 准确性
检测结果如表所示。（略）
4 讨论
总胆红素标准品很不稳定，根据线性结果来看，虽然相关系数r很好，但吸光度所得值或全部升高或全部降低，即吸光度的增加与其相应的理论浓度不呈正比关系。在有些标准中要求所得值与理论值的偏差应≤10%，如按这一要求来判定线性，总胆红素的线性就远远达不到要求，所以考虑到总胆红素试剂盒这一特殊性，在标准中不但要求r值，同时还应要求所得值与理论值的偏差。
在分析方法学上，本次试验采用的是一点定标法。在做线性这一项目检测时，由于总胆红素试剂盒中说明书要求的试剂与标准液的比例较低，这就要求必须要用高浓度的标准液来定标和做线性，但如果用高浓度的标准液定标后，再做准确性时，对准确性的结果影响却非常的大。如果在试验中用高浓度的标准品定标做线性，再用低浓度的标准液定标做准确性，这样得出的结果虽好，但却也失去了检测的意义。对于很多诊断试剂来说，因为考虑到操作简便，标准曲线法基本上是一个被淘汰了的方法。
总胆红素浓度在171 μmol/L以内线性良好，高于此值时可用生理盐水将血清稀释后重测，结果乘以稀释倍数，且总胆红素在10～37℃范围内测定不受温度变化的影响，呈色在2 h内非常稳定。在实验中虽然都用的是终点法且反应原理一样，但有些带血清空白，有些又不用带血清空白。因为在试验前都是要清除试剂空白，血清空白对结果到底有怎样的影响还值得研究。