【摘 要】
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目的优化人工抗原合成条件及免疫程序,制备亲和力高、特异性强及检测限低的多克隆抗体,并建立适用中华绒螯蟹中恩诺沙星残留检测的免疫学分析方法。方法采用优化的碳二亚胺法
【机 构】
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苏州大学医学部基础医学与生物科学学院
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目的优化人工抗原合成条件及免疫程序,制备亲和力高、特异性强及检测限低的多克隆抗体,并建立适用中华绒螯蟹中恩诺沙星残留检测的免疫学分析方法。方法采用优化的碳二亚胺法合成免疫原(c BSA-ENR)、N-羟基琥珀酰亚胺活性酯法合成包被抗原(c OVA-ENR)及免疫方式等技术,制备恩诺沙星多克隆抗体并用方阵ELISA及间接竞争ELISA对其滴度、亲和力及特异性进行分析,进而应用于中华绒螯蟹加标样品回收率和精密度的检测。结果恩诺沙星多抗的工作浓度为1:80000,IC50为8.68ng/m L,有效检测范围为0.4~125ng/m L,与环丙沙星等竞争物的交叉反应率均小于0.5%;分别在中华绒螯蟹血淋巴、肌肉、肝胰腺样品中添加10、30和90ng/g(ng/m L)3个浓度水平的恩诺沙星,平均回收率分别为72.23%~85.45%、68.66%~74.12%和50.17%~56.30%,相对标准偏差分别为7.64%~12.26%、12.41%~22.23%和28.28%~35.40%。结论通过优化制备技术获得恩诺沙星多克隆抗体,并建立的免疫分析方法能够满足中华绒螯蟹等水产品中恩诺沙星残留检测的基本要求。
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