【摘 要】
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目的观察在周期性应力介导成肌细胞凋亡中内质网应激需肌醇酶-1(IRE-1)-c-jun氨基端激酶(JNK)信号通路的作用。方法以大鼠L6成肌细胞为实验对象,构建体外培养-力学刺激模型。应用应力加载装置分别加1、2、6、12、24 h的周期性张应力(拉伸变形率为15%,频率为10次循环/分),对照组不加力(0 h)。Hochest 33258染色、膜联蛋白V(Annexin V)-异硫氰酸荧光素(F
【机 构】
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266071青岛大学医学院附属青岛市立医院口腔医学中心,266071青岛大学医学院附属青岛市立医院口腔医学中心,266071青岛大学医学院附属青岛市立医院口腔医学中心,266071青岛大学医学院附属青
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目的观察在周期性应力介导成肌细胞凋亡中内质网应激需肌醇酶-1(IRE-1)-c-jun氨基端激酶(JNK)信号通路的作用。
方法以大鼠L6成肌细胞为实验对象,构建体外培养-力学刺激模型。应用应力加载装置分别加1、2、6、12、24 h的周期性张应力(拉伸变形率为15%,频率为10次循环/分),对照组不加力(0 h)。Hochest 33258染色、膜联蛋白V(Annexin V)-异硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙锭(PI)流式细胞术分别检测凋亡细胞的数目及凋亡率;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测内质网应激相关因子C/EBP同源蛋白(CHOP)、凋亡信号调节激酶-1(ASK-1)、肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)和JNK mRNA的表达变化;加入IRE-1特异性抑制剂STF-083010,检测ASK-1、TRAF2和JNK m RNA的表达变化。
结果随应力加载时间的延长,凋亡细胞的数目、凋亡率呈一致上升趋势,且在24 h达峰值[(14.34±0.77)个];CHOP、ASK-1、TRAF2 mRNA表达量随着应力加载时间的延长逐渐上升,并在24 h达最高值,分别为4.19± 1.76、3.46±0.84、3.78±1.38(P< 0.05),JNK m RNA的表达量在0~ 2 h逐渐上升后逐渐下降,随后又逐渐上升在24 h达最高值(3.04±0.79,P< 0.05);加入大鼠IRE-1特异性抑制剂STF-083010 后,TRAF2、ASK-1表达量均明显减少(P< 0.05)。
结论周期性张应力可诱导成肌细胞的凋亡,凋亡率随着应力加载时间的延长而升高。CHOP、TRAF2、ASK-1、JNK m RNA的表达量升高,提示内质网相关的凋亡途径参与了应力介导的成肌细胞的凋亡。加入IRE-1抑制剂后,TRAF2、ASK-1、JNK m RNA表达量均明显降低,提示IRE-1-JNK通路参与了应力介导的成肌细胞凋亡。
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