【摘 要】
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目的探讨百草枯（PQ）能否诱导人外周血中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）的形成。方法分离健康者外周血中性粒细胞，苏木素-伊红（HE）染色后进行细胞鉴定；分别采用浓度为0（对照）、200、400、600、800、1 000、1 200 μmol/L的PQ溶液处理细胞，建立PQ中毒的体外模型，应用CCK-8细胞增殖和细胞毒性检测试剂盒检测细胞存活率，选择半数致死量的PQ浓度作为实验干预点。根据细胞活性检
【机 构】
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200080 上海，南京医科大学附属上海一院临床医学院危重病科,200080 上海，南京医科大学附属上海一院临床医学院危重病科,200080 上海，南京医科大学附属上海一院临床医学院危重病科,2000
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目的探讨百草枯（PQ）能否诱导人外周血中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）的形成。
方法分离健康者外周血中性粒细胞，苏木素-伊红（HE）染色后进行细胞鉴定；分别采用浓度为0（对照）、200、400、600、800、1 000、1 200 μmol/L的PQ溶液处理细胞，建立PQ中毒的体外模型，应用CCK-8细胞增殖和细胞毒性检测试剂盒检测细胞存活率，选择半数致死量的PQ浓度作为实验干预点。根据细胞活性检测结果进行细胞染毒（PQ染毒组），以未染毒细胞作为对照。采用免疫荧光染色显微成像定性鉴定NETs形成情况；采用PicoGreen核酸定量分析试剂盒检测细胞上清中游离DNA含量；采用蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）检测细胞上清中瓜氨酸化组蛋白3（H3Cit）、髓过氧化物酶（MPO）的蛋白表达。
结果HE染色鉴定中性粒细胞纯度约95%；经不同浓度PQ建立中毒体外模型后发现，PQ浓度为800 μmol/L时细胞存活率为（58±2）%，以该半数致死量作为实验干预点。免疫荧光定性观察显示，对照组中性粒细胞仅有少量H3Cit及MPO表达，无NETs形成；而800 μmol/L PQ可以刺激中性粒细胞产生由DNA、H3Cit和MPO形成的NETs。定量结果显示，与对照组比较，PQ染毒组细胞上清中游离DNA含量显著升高（μg/L：2 235±462比561±87，P<0.01）；且PQ染毒组细胞上清中H3Cit和MPO蛋白表达量均较对照组明显升高〔H3Cit蛋白表达（灰度值）：0.23±0.03比0.11±0.01，MPO蛋白表达（灰度值）：0.47±0.05比0.21±0.04，均P<0.05〕。
结论800 μmol/L的PQ可以诱导人外周血中性粒细胞形成NETs。
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