【摘 要】
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目的 探讨人乳头状瘤病毒(HPV)16型多肽疫苗的制备,并观察HPV16多肽疫苗的体内外效应.方法 (1)针对抗原加工相关转运子(TAP)设计HPV16 E7蛋白的主要组织相容性复合物Ⅰ类分子
【机 构】
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华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产科
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目的 探讨人乳头状瘤病毒(HPV)16型多肽疫苗的制备,并观察HPV16多肽疫苗的体内外效应.方法 (1)针对抗原加工相关转运子(TAP)设计HPV16 E7蛋白的主要组织相容性复合物Ⅰ类分子(MHC-I)的抗原结合表位,利用生物信息学分析平台筛选出一致性较高、特异性及亲和力较强的HPV16 E7多肽作为研究对象制备HPV16多肽疫苗用于以下研究,本研究共筛选出3段多肽,分别命名为E7Pa、E7Pb、E7Pc.(2)C57BL/6小鼠注射鼠肺上皮细胞株TC-1细胞(为鼠源性的HPV16阳性的肿瘤细胞株)后,采用等额抽取的随机方法分为5组,ETPa+二核苷胞嘧啶(CpG)、E7Pb+CpG、E7Pc+CpG[均为实验组,分别加入终浓度为50μg/ml的E7Pa、E7Pb、E7Pc和终浓度为12 mg/L的刀豆蛋白(ConA)]、CpG(为阳性对照,加入终浓度为12 mg/L 的Con A)和空白对照组(不做任何处理).采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测各组作用不同时间后小鼠脾T淋巴细胞的体外增殖效应,乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测小鼠脾T淋巴细胞在不同效靶比下的体外细胞毒T淋巴细胞(CTL)活性,实时荧光定量RT-PER技术检测小鼠肿瘤组织中γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素2(IL-2)mRNA的表达水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠外周血中IFN-γ、IL-2的表达水平,通过定期测量比较各组小鼠接种HPV16多肽疫苗后体内肿瘤体积的变化.结果 (1)本研究筛选出了一致性较高、特异性及亲和力较强的3段HPV16 E7多肽作为研究对象制备HPV16多肽疫苗,分别命名为E7Pa、E7Pb、E7Pc.(2)MTT比色法检测显示,在接种疫苗24、48、72、96 h后,以E7Pa+CpG组的增殖效应最明显,其细胞增殖率分别为(131±32)%、(302±15)%、(552±28)%、(731±24)%,明显高于空白对照组的(72±15)%、(120±57)%、(176±41)%、(288±29)%(P
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