【摘 要】
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目的诱导表达可生物素化的人类白细胞抗原HLA-DRB1~*07:01蛋白,以制备MHC四聚体,为后续研究肽段与MHCⅡ的结合力、检测抗原特异性T细胞提供必要工具。方法从Gen Bank中获得HL
【基金项目】
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国家自然科学基金资助(编号:81373128);国家重大科技专项重大课题任务(编号:2016ZX08011-005);广州医科大学科研项目(编号:2015C19)
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目的诱导表达可生物素化的人类白细胞抗原HLA-DRB1~*07:01蛋白,以制备MHC四聚体,为后续研究肽段与MHCⅡ的结合力、检测抗原特异性T细胞提供必要工具。方法从Gen Bank中获得HLA-DRB1~*07:01的c DNA序列,人工合成基因片段时,α链、β链的跨膜区加入亮氨酸拉链,其中β链还在跨膜区加入Avi标签。α链和β链分别与表达载体p ET-44a和p ETduet-1-Bira连接后转入大肠杆菌Rosetta构建原核表达体系,通过氨苄青霉素(Amp)抗性基因筛选,利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,获得目的蛋白,并用免疫印迹法分析鉴定目的蛋白。结果成功构建了重组质粒p ET-44a-HLA-DRB1~*07:01α链和p ETduet-1-HLA-DRB1~*07:01β链-Bir A,0.25 mmol/L的IPTG可高效诱导目的蛋白表达,α链可被HLA-DRA抗体特异识别,目的蛋白可生物素化且可被链霉素特异识别。目的蛋白主要以包涵体形式表达,经反复洗涤可获得高纯度的蛋白。结论成功构建了HLA-DRB1~*07:01蛋白的原核表达系统,并得到纯化的可生物素化重组表达蛋白,为进一步制备HLA-肽四聚体奠定了实验基础。
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