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摘 要：本实验对墨旱莲颗粒的制备工艺进行研究并对其质量标准进行研究。采用高校液相测定了墨旱莲颗粒的含量。方法：采用安捷伦十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱（218mm×4.6mm，5μm），0.2%甲酸-乙腈（94∶6），检测波长为327nm，流速为1.0ml/min，柱温为30℃。绿原酸在0.1～3.2mg·mL-1范围内呈良好的线性关系。
关键词：墨旱莲颗粒；工艺；研究
墨旱莲别名金陵草（《千金月令》），猢孙头（《居家必用事类全集》），莲草（《滇南本草》），墨斗草（《医学正传》），莲子草（《唐本草》），旱莲草、旱莲子（《本草图经》），白旱莲（《履巉岩本草》），野水凤仙（《药材资料汇编》），水风仙草（《江苏植药志》），黑墨草（《广西药植图志》），白花蟛蜞菊（《岭南采药录》），墨记菜（《现代实用中药》），古城墨（《广西中药志》）等。墨旱莲具有滋补肝肾，凉血止血的功效。《生草药性备要》记载：“治跌打伤，理酒顶，化痰，杀螆，止痒，干水。”墨旱莲用于牙齿松动、腰膝酸软、崩漏下血、须发早白、眩晕耳鸣、外伤出血等。墨旱莲含有维生素A，鳢肠素，2-（丁二炔基）-5-（乙烯乙炔基）噻吩，2-（丁-二炔基）-5-（4-氯-3-羟丁炔-1-基）噻吩，乙酸（丁烯-3-炔-1-基）二联噻吩基甲醇酯等。墨旱莲具有保肝、抗纤维化、抗炎镇痛、免疫调节、抗自由基抗氧化、抗肿瘤和酶激活等药理作用。本实验对墨旱莲颗粒的制备工艺进行研究。
1 仪器与试药
vertex高效液相色谱仪（上海禾工科学仪器有限公司）；YP1004万分之一电子分析天平（南京麒麟分析仪器有限公司）；Orion Star A 台式/便携式 基础型pH测量仪（赛默飞世尔科技水质分析仪器）；US-30M超声波清洗器（中科仪（北京）仪器有限公司）；通微EasySep-1020高效液相色谱仪（上海通微分析技术有限公司）；SPECORD 250 PLUS紫外可见分光光度计（德国耶拿分析仪器股份公司）；RE-2000E型旋转蒸发器（西安禾普生物科技有限公司）。甲醇（扬州市江都区成宇化工厂）、乙腈（扬州市江都区成宇化工厂）、正己烷（扬州市江都区成宇化工厂）、丙酮（扬州市江都区成宇化工厂）、甲酸（扬州市江都区成宇化工厂）。淀粉（广州宏鑫生物科技有限公司）、糊精（广州宏鑫生物科技有限公司）、乳糖（广州宏鑫生物科技有限公司）、蔗糖（广州宏鑫生物科技有限公司）。
2 墨旱莲颗粒的制备
取墨旱莲加水温浸30分钟，煎煮二次，每次1.5小时，分次滤过，合并滤液，浓缩至相对密度为1.22（70℃）的清膏，冷至40℃时，搅拌下缓缓加入乙醇，使含醇量达70%，充分搅拌，静置12小时，滤取上清液，回收乙醇至无醇味并浓缩成相对密度为1.30（65℃）的清膏。将蔗糖、糊精等辅料适量，投入CH槽形混合机中，混合15分钟，加入清膏和适量70%乙醇，混合约10分钟，制成软材。将混合制得的软材放在摇摆式颗粒机中，用14目筛制粒，干燥，干燥后颗粒置10目-60目振动筛整粒。整粒结束后，在总混20分钟，分装，即得。
3 质量研究
3.1 性状本品为颗粒剂。
3.2 含量测定
3.2.1 色谱条件
色谱柱为Kromasil C18（规格4.6mm×250mm，5μm）；0.2%甲酸-乙腈（94∶6）为流动相；流速1.0mL·min-1；检测波长为327nm；柱温：30℃。
3.2.2 供试品溶液的制备
取墨旱莲颗粒适量加10毫升水溶解，并定容至25mL量瓶中，用0.45μ微孔滤膜过滤，即得。
3.2.3 对照品溶液的制备
精密称取绿原酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成0.2mg·mL-1的溶液，即得。
3.2.4 阴性干扰试验
按处方取蔗糖、糊精等辅料，按方中比例和制备工艺方法制成阴性制剂，用供试品溶液制备的方法，制成阴性对照溶液，用以上选定的测定条件进行吸收曲线绘制，观察在与绿原酸相同的保留时间处是否存在吸收峰，结果：在选定条件下测得的阴性液吸收曲线在与绿原酸相同保留时间处不存在吸收峰，表明选定的条件测定绿原酸无干扰，具有较强的专属性。
3.2.5 标准曲线的制备
精密称取适量绿原酸对照品，加入流动相溶液使溶解分别配制成每毫升含0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2毫克的溶液。分别精密上述溶液吸取10μL，注人液相色谱仪，依照2.1项下的色谱条件测定，记录色谱峰。以峰面积（Y）对数为纵坐标，对照品进样量（X）对数为横坐标，绘制标准曲线。结果表明，绿原酸在0.1～3.2mg·mL-1范围内呈良好的线性关系。
3.2.6 精密度试验
精密吸取同一供试品溶液各10μL重复进样6次，测定，记录峰面积，结果绿原酸的色谱峰面积的RSD（n=6）0.83%。
3.2.7 墨旱莲颗粒含量
分别测定三批墨旱莲颗粒，绿原酸含量分别为0.81mg/g、0.82mg/g、0.83mg/g。绿原酸含量限度为不少于0.7mg/g。
4 鉴别
取墨旱莲颗粒适量，加乙醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液挥干，加无水乙醇1ml溶解残渣。另取墨旱莲对照药材2g，加乙醇20ml，浸泡2小时，超声处理30分钟，滤过，滤液挥干，加无水乙醇1ml溶解残渣，作为对照品溶液。取蔗糖、糊精按样品制备工艺制成阴性对照样品，按上述方法制成阴性对照样品。吸取上述溶液，分别点于同一高效硅胶预制薄层板（HPTLC-plate Nano-DURASIL-20，MN）上，以正己烷-丙酮（9：1）为展开剂，置用展开剂预饱和15分钟的展开缸内，展开，取出，晾干，至紫外灯（365nm）下视检。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，而阴性对照无干扰。
参考文献
[1]王晓丹，史桂云，辛晓明，曹明亮，朱玉云，高允生.旱莲草水提物对小鼠的抗炎镇痛作用[J].泰山医学院学报，2005（06）.
[2]林朝朋，芮汉明，许晓春.墨旱莲黄酮类提取物抗自由基作用及体内抗氧化功能的研究[J].军事医学科学院院刊，2005（04）.
[3]庄晓燕，杨菁，李华侃，于冬梅，王建.热盛胃出血小鼠模型的制作及墨旱莲对其止血作用机制的研究[J].数理医药学杂志，2010（01）.
[4]涂彩霞，张荣鑫，马景昕，刘亚玲，刘影，李宏.墨旱莲乙醇提取物动物致色素作用和对小鼠B16黑素瘤细胞黑素生成的影响[J].中国中西医结合皮肤性病学杂志，2006（01）.
[5]刘雪英，赵越平，蒋永培，汤海峰.墨旱莲乙酸乙酯总提物对T淋巴细胞功能的调节[J].第四軍医大学学报，2001（08）.
[6]朱玉云，姜隆梅，张峰，陈伟，陈美华，王晓丹，高允生.旱莲草水提物增加小鼠耐缺氧存活时间的量效关系[J].中国临床康复，2005（24）.
关键词：墨旱莲颗粒；工艺；研究
墨旱莲别名金陵草（《千金月令》），猢孙头（《居家必用事类全集》），莲草（《滇南本草》），墨斗草（《医学正传》），莲子草（《唐本草》），旱莲草、旱莲子（《本草图经》），白旱莲（《履巉岩本草》），野水凤仙（《药材资料汇编》），水风仙草（《江苏植药志》），黑墨草（《广西药植图志》），白花蟛蜞菊（《岭南采药录》），墨记菜（《现代实用中药》），古城墨（《广西中药志》）等。墨旱莲具有滋补肝肾，凉血止血的功效。《生草药性备要》记载：“治跌打伤，理酒顶，化痰，杀螆，止痒，干水。”墨旱莲用于牙齿松动、腰膝酸软、崩漏下血、须发早白、眩晕耳鸣、外伤出血等。墨旱莲含有维生素A，鳢肠素，2-（丁二炔基）-5-（乙烯乙炔基）噻吩，2-（丁-二炔基）-5-（4-氯-3-羟丁炔-1-基）噻吩，乙酸（丁烯-3-炔-1-基）二联噻吩基甲醇酯等。墨旱莲具有保肝、抗纤维化、抗炎镇痛、免疫调节、抗自由基抗氧化、抗肿瘤和酶激活等药理作用。本实验对墨旱莲颗粒的制备工艺进行研究。
1 仪器与试药
vertex高效液相色谱仪（上海禾工科学仪器有限公司）；YP1004万分之一电子分析天平（南京麒麟分析仪器有限公司）；Orion Star A 台式/便携式 基础型pH测量仪（赛默飞世尔科技水质分析仪器）；US-30M超声波清洗器（中科仪（北京）仪器有限公司）；通微EasySep-1020高效液相色谱仪（上海通微分析技术有限公司）；SPECORD 250 PLUS紫外可见分光光度计（德国耶拿分析仪器股份公司）；RE-2000E型旋转蒸发器（西安禾普生物科技有限公司）。甲醇（扬州市江都区成宇化工厂）、乙腈（扬州市江都区成宇化工厂）、正己烷（扬州市江都区成宇化工厂）、丙酮（扬州市江都区成宇化工厂）、甲酸（扬州市江都区成宇化工厂）。淀粉（广州宏鑫生物科技有限公司）、糊精（广州宏鑫生物科技有限公司）、乳糖（广州宏鑫生物科技有限公司）、蔗糖（广州宏鑫生物科技有限公司）。
2 墨旱莲颗粒的制备
取墨旱莲加水温浸30分钟，煎煮二次，每次1.5小时，分次滤过，合并滤液，浓缩至相对密度为1.22（70℃）的清膏，冷至40℃时，搅拌下缓缓加入乙醇，使含醇量达70%，充分搅拌，静置12小时，滤取上清液，回收乙醇至无醇味并浓缩成相对密度为1.30（65℃）的清膏。将蔗糖、糊精等辅料适量，投入CH槽形混合机中，混合15分钟，加入清膏和适量70%乙醇，混合约10分钟，制成软材。将混合制得的软材放在摇摆式颗粒机中，用14目筛制粒，干燥，干燥后颗粒置10目-60目振动筛整粒。整粒结束后，在总混20分钟，分装，即得。
3 质量研究
3.1 性状本品为颗粒剂。
3.2 含量测定
3.2.1 色谱条件
色谱柱为Kromasil C18（规格4.6mm×250mm，5μm）；0.2%甲酸-乙腈（94∶6）为流动相；流速1.0mL·min-1；检测波长为327nm；柱温：30℃。
3.2.2 供试品溶液的制备
取墨旱莲颗粒适量加10毫升水溶解，并定容至25mL量瓶中，用0.45μ微孔滤膜过滤，即得。
3.2.3 对照品溶液的制备
精密称取绿原酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成0.2mg·mL-1的溶液，即得。
3.2.4 阴性干扰试验
按处方取蔗糖、糊精等辅料，按方中比例和制备工艺方法制成阴性制剂，用供试品溶液制备的方法，制成阴性对照溶液，用以上选定的测定条件进行吸收曲线绘制，观察在与绿原酸相同的保留时间处是否存在吸收峰，结果：在选定条件下测得的阴性液吸收曲线在与绿原酸相同保留时间处不存在吸收峰，表明选定的条件测定绿原酸无干扰，具有较强的专属性。
3.2.5 标准曲线的制备
精密称取适量绿原酸对照品，加入流动相溶液使溶解分别配制成每毫升含0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2毫克的溶液。分别精密上述溶液吸取10μL，注人液相色谱仪，依照2.1项下的色谱条件测定，记录色谱峰。以峰面积（Y）对数为纵坐标，对照品进样量（X）对数为横坐标，绘制标准曲线。结果表明，绿原酸在0.1～3.2mg·mL-1范围内呈良好的线性关系。
3.2.6 精密度试验
精密吸取同一供试品溶液各10μL重复进样6次，测定，记录峰面积，结果绿原酸的色谱峰面积的RSD（n=6）0.83%。
3.2.7 墨旱莲颗粒含量
分别测定三批墨旱莲颗粒，绿原酸含量分别为0.81mg/g、0.82mg/g、0.83mg/g。绿原酸含量限度为不少于0.7mg/g。
4 鉴别
取墨旱莲颗粒适量，加乙醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液挥干，加无水乙醇1ml溶解残渣。另取墨旱莲对照药材2g，加乙醇20ml，浸泡2小时，超声处理30分钟，滤过，滤液挥干，加无水乙醇1ml溶解残渣，作为对照品溶液。取蔗糖、糊精按样品制备工艺制成阴性对照样品，按上述方法制成阴性对照样品。吸取上述溶液，分别点于同一高效硅胶预制薄层板（HPTLC-plate Nano-DURASIL-20，MN）上，以正己烷-丙酮（9：1）为展开剂，置用展开剂预饱和15分钟的展开缸内，展开，取出，晾干，至紫外灯（365nm）下视检。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，而阴性对照无干扰。
参考文献
[1]王晓丹，史桂云，辛晓明，曹明亮，朱玉云，高允生.旱莲草水提物对小鼠的抗炎镇痛作用[J].泰山医学院学报，2005（06）.
[2]林朝朋，芮汉明，许晓春.墨旱莲黄酮类提取物抗自由基作用及体内抗氧化功能的研究[J].军事医学科学院院刊，2005（04）.
[3]庄晓燕，杨菁，李华侃，于冬梅，王建.热盛胃出血小鼠模型的制作及墨旱莲对其止血作用机制的研究[J].数理医药学杂志，2010（01）.
[4]涂彩霞，张荣鑫，马景昕，刘亚玲，刘影，李宏.墨旱莲乙醇提取物动物致色素作用和对小鼠B16黑素瘤细胞黑素生成的影响[J].中国中西医结合皮肤性病学杂志，2006（01）.
[5]刘雪英，赵越平，蒋永培，汤海峰.墨旱莲乙酸乙酯总提物对T淋巴细胞功能的调节[J].第四軍医大学学报，2001（08）.
[6]朱玉云，姜隆梅，张峰，陈伟，陈美华，王晓丹，高允生.旱莲草水提物增加小鼠耐缺氧存活时间的量效关系[J].中国临床康复，2005（24）.