【摘 要】
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目的 探讨第3天(Day3)优质胚胎囊胚培养结束后剩余胚胎条件培养液(Embryo-conditioned,medium,ECM)对子宫内膜基质细胞(Endometrial stromal cells,ESCs)分泌功能的影响.方法
【机 构】
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深圳中山泌尿外科医院生殖中心,深圳市围着床期生殖免疫重点实验室,深圳中山生殖与遗传研究所,深圳518045
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目的 探讨第3天(Day3)优质胚胎囊胚培养结束后剩余胚胎条件培养液(Embryo-conditioned,medium,ECM)对子宫内膜基质细胞(Endometrial stromal cells,ESCs)分泌功能的影响.方法 收集Day3优质胚胎囊胚培养结束后ECM,根据囊胚形成情况将ECM分成AB两种类型:A型有优质囊胚形成,B型无囊胚形成.同步收集相同培养皿中未培养胚胎的空白滴作为对照,定义为C型ECM.分别采用A、B、C型ECM作为ESCs培养基添加剂,通过蛋白芯片法分析不同类型ECM添加后ESCs分泌蛋白的变化.结果 AAH-CYT-G3型蛋白芯片一共可检测42个分泌蛋白,在扣除背景荧光信号及归一化处理后,以荧光信号值＞ 150作为筛选阈值,在添加A、B和C型ECM的ESCs培养上清中,分别检测到23、24和24个蛋白表达.以0.67＜表达差异倍数＜1.5作为差异蛋白筛选标准发现,与对照组相比,A型ECM添加后,ESCs分泌,IL-6,GRO,IFN-γ和IL-12A增加,分泌CXCLI减少.B型ECM添加后,ESCs分泌IFN-γ,IL-15增加,分泌GM-CSF,IL-4减少.A型、B型相互比较发现,A型ECM添加促进ESCs中Th2型因子IL-6的分泌;B型ECM添加增加ESCs中IL-15的表达,减少IL-4和GM-CSF的表达,诱导出现Th1型免疫环境.结论 不同类型ECM影响ESCs分泌不同类型的细胞因子,根据ECM添加后ESCs培养上清中分泌因子种类的分析,可能作为评估ECM对应胚胎质量的一种无创性方法.
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