【摘 要】
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以犬胎原代细胞，采用同步接种、带毒传代和添加新细胞的方法，从１例腹泻犬脾脏和１例临床健康犬肠内容物中分离出２株犬冠状病毒（ＣＣＶＹＳ１，ＣＣＶＣＩ１）。该２株病毒可使ＣＲＦＫ细胞出现典型的细胞融合病变，与从美国引
【机 构】
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解放军农牧大学军事兽医研究所; 吉林农业大学动物科学系;
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以犬胎原代细胞，采用同步接种、带毒传代和添加新细胞的方法，从１例腹泻犬脾脏和１例临床健康犬肠内容物中分离出２株犬冠状病毒（ＣＣＶＹＳ１，ＣＣＶＣＩ１）。该２株病毒可使ＣＲＦＫ细胞出现典型的细胞融合病变，与从美国引进的ＣＣＶＮＬ－１８参考株形成的细胞病变相似；电镜负染和超薄切片观察，分离毒株细胞培养物中均含有典型的冠状病毒粒子，并形成胞浆内包涵体；经理化学、生物学鉴定，具有ＣＣＶ的特性；间接免疫荧光试验鉴定，证明为ＣＣＶ；动物回归试验证明，ＣＣＶＹＳ１毒力较强，ＣＣＶＣＩ１毒力较弱。利用ＲＴ－ＰＣＲ技术，分别扩增了ＣＣＶＮＬ－１８、ＣＣＶＹＳ１和ＣＣＶＣＩ１株纤突蛋白（Ｓ）主要功能区基因片段，经克隆、序列测定、计算机比较核苷酸和推导的氨基酸序列，结果为：（１）ＣＣＶＹＳ１和ＣＣＶＣＩ１与国外发表的Ｋ３７８等５株ＣＣＶ和ＣＣＶＭＬ－１８株的同源性为９１．７％～９９．４％和９２．０％～９９．４％，而与ＴＧＥＶ和ＦＩＰＶ的同源性为９０．２％和８８．０％～９０．０％；Ａｂ抗原亚位点与ＣＣＶ相同，不同于ＴＧＥＶ和ＦＩＰＶ，进一步证明本研究分离的病毒为ＣＣＶ；（２）ＣＣＶＹＳ１、ＣＣＶＣＩ１株与Ｋ３７８等ＣＣＶ强毒株同源?
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