【摘 要】
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为研究体外磷酸根离子对嗜热菌(Thermus sp.3041)碱性磷酸酶TAPND27耐热性的影响,通过克隆于高表达质粒上编码TAPND27的基因在E.coli中的诱导表达和蛋白产物的纯化,获得了电
【机 构】
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复旦大学生命科学学院遗传学研究所,上海,200433
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为研究体外磷酸根离子对嗜热菌(Thermus sp.3041)碱性磷酸酶TAPND27耐热性的影响,通过克隆于高表达质粒上编码TAPND27的基因在E.coli中的诱导表达和蛋白产物的纯化,获得了电泳纯的TAPND27.耐热性实验表明磷酸根离子能显著提高该酶的热稳定性,在10 mmol/L磷酸根离子存在下,TAPND27的Tm值从91℃上升到了97℃;酶的动力学实验证实无机磷酸盐(Pi)对TAP-ND27的酶活性有可逆竞争性抑制作用,Ki值为0.99×10-4mol/L.上述结果说明,TAPND27耐热性的提高是由于磷酸根离子对TAPND27活性位点的竞争性结合,这种结合,推测为Pi与氨基酸残基间的非共价相互作用,减小了TAPND27的自由能,从而提高了它的热稳定性.
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