论文部分内容阅读
为定量测定瘤胃脂肪分解菌，试验构建了脂肪分解菌实时荧光定量PCR的标准品及标准曲线。提取瘤胃微生物总DNA，以脂肪分解菌16 S rDNA特异性引物进行PCR扩增，回收PCR产物，与PMD19-T Vector连接并转化大肠杆菌。阳性重组质粒经PCR和测序鉴定后，将提取的质粒DNA进行梯度稀释并作为模板，利用荧光定量PCR反应做出标准曲线。结果显示：PCR产物与目的基因的相似性大于99％，以不同稀释度的重组质粒为模板获得的荧光定量PCR扩增曲线差异明显，构建了相关系数接近1的标准曲线，且熔解曲线峰值单一。