【摘 要】
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目的 建立应用杆状病毒系统制备8型腺相关病毒(adeno-associated virus, AAV)的技术体系,并初步检测所制备病毒的感染活力.方法 采用杆状病毒生产系统包装rAAV8-EGFP,经高效
【机 构】
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浙江理工大学生命科学学院新元医学与生物技术研究所,杭州,310018;第二军医大学东方肝胆外科医院病毒基因治疗实验室,上海,200438;浙江理工大学生命科学学院新元医学与生物技术研究所,杭州,310
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目的 建立应用杆状病毒系统制备8型腺相关病毒(adeno-associated virus, AAV)的技术体系,并初步检测所制备病毒的感染活力.方法 采用杆状病毒生产系统包装rAAV8-EGFP,经高效液相色谱法提取并纯化病毒,实时荧光定量PCR测定病毒滴度,通过观察绿色荧光蛋白的表达强度来检测rAAV8-EGFP对HEK-293细胞的感染活力.结果 实时荧光定量PCR显示成功制备高滴度rAAV8-EGFP,滴度可达1.5×1012 vg/ml,100 ml摇瓶共得到1.5×1013 vg rAAV8-EGFP病毒颗粒;感染后的HEK-293细胞具有较强的绿色荧光蛋白表达.结论 应用杆状病毒系统成功制备高滴度、高活力的重组腺相关病毒,为后续研究奠定了基础.
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