【摘 要】
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目的:采用CRISPR/Cas9基因编辑技术建立sonic hedgehog(shh)基因敲除斑马鱼模型,并初步鉴定斑马鱼视网膜发育表型。方法:针对shh基因构建向导RNA(sgRNA)表达载体并转录,利用C
【机 构】
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南京医科大学附属妇产医院/南京市妇幼保健院儿童保健科
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目(81600779;81670900);南京市医学科技发展基金资助项目(ZKX16061)
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目的:采用CRISPR/Cas9基因编辑技术建立sonic hedgehog(shh)基因敲除斑马鱼模型,并初步鉴定斑马鱼视网膜发育表型。方法:针对shh基因构建向导RNA(sgRNA)表达载体并转录,利用Cas9显微注射到斑马鱼受精卵中,经DNA鉴定及PCR扩增,初步鉴定基因编辑情况。观察基因敲除的斑马鱼形态,采用HE染色观察视网膜发育情况。结果:成功构建出shh杂交突变稳定遗传的斑马鱼种系,与野生型斑马鱼相比,shha+/-突变体胚胎及幼鱼多个系统的发育受到明显影响,出现鱼卵发育停滞、脊柱弯曲、心包水
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