【摘 要】
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目的: 实现抗人CD40的人-鼠嵌合抗体(ch-5C11)在的CHO细胞中的稳定表达并对其生物学活性进行初步的研究.方法: pIRES/hu5C11嵌合抗体重组表达质粒用脂质体法转染CHO细胞, 采
【机 构】
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苏州大学附属第一医院,苏州大学医学生物技术研究所
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目的: 实现抗人CD40的人-鼠嵌合抗体(ch-5C11)在的CHO细胞中的稳定表达并对其生物学活性进行初步的研究.方法: pIRES/hu5C11嵌合抗体重组表达质粒用脂质体法转染CHO细胞, 采用RT-PCR对CHO细胞进行基因水平鉴定, 以流式细胞术(FCM)和Western blot对表达上清中ch-5C11人免疫球蛋白Fc段和κ链成分进行检测, 利用Protein G亲和层析和Lowry法进行纯化和定量, MTT实验检测表达ch-5C11对Daudi细胞增殖的抑制效应.结果: 获得稳定分泌目的蛋白的CHO稳定株, RT-PCR结果表明目的基因成功整合在CHO稳定株中, FCM和Western blot结果表明稳定株上清中含有抗人CD40抗体, 且含人免疫球蛋白Fc段和κ链; Lowry法定量ch-5C11浓度为0.535 mg/L, 并经SDS-PAGE蛋白电泳鉴定纯度良好; ch-5C11能抑制Daudi细胞增殖.结论: 获得了持续分泌ch-5C11的CHO稳定株, 功能学研究显示ch-5C11能抑制B细胞淋巴瘤细胞株体外增殖.
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