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摘要：优化干姜和丹参有效成分提取方法。方法：以提取率和有效成分含量为指标，L9（34）正交实验考察液料比、溶剂浓度、提取时间和提取次数，优化活血中药有效成分提取条件。结果：最佳提取条件为液料比1∶16，提取75min，提取液浓度在80%，提取3次。结论：本实验优化的提取方法稳定、可行。
关键词：干姜；丹参； 6-姜酚；丹参酮ⅡA
中图分类号： R284 文献标识码： A DOI编号： 10.14025/j.cnki.jlny.2018.02.017
干姜（Rhizoma Zingiberis.）为姜科姜素植物的干燥根，主要含有干姜挥发油和姜辣素，具有温中助阳，对于体虚有寒的患者或者冬季四肢冷感较甚的人群有很好的作用[1]。丹参（Salviae Miltiorrhiza Bge.）属唇形科植物，它的干燥根和茎主要含有丹参酮，有活血祛瘀，通经止痛，清心除烦，凉血消痈，胸痹心痛，脘腹胁痛的功效[2]。干姜和丹参均味性偏温，辛散，合用可起到活血化瘀、补虚、温通经脉的作用。提取干姜和丹参有效成分制备成便于携带的剂型，可减少传统中药泡脚中药液熬制过程，方便中药足浴；制备成剂型后中药足浴产品与直接用中药材足浴相比，成品体积小易于携带，使用方便，保质期更长。
1 实验仪器试剂
干姜、丹参饮片（四川利民中药饮片有限公司）；乙醇（天津市永达化学试剂有限公司）安捷伦1200高效液相色谱色谱仪，C18柱（4.6mm×150mm，5μm）。
2 实验方法
2.1 中药有效成分的提取
按干姜：丹参（5∶1）的比例分别称取干姜10.0g、丹参2.0g。加热回流法提取，以提取物粉末量、提取液中6-姜酚和丹参酮ⅡA浓度分别指标，L9（34）正交试验考察液料比、乙醇浓度和提取时间对提取效果的影响，优化提取工艺[3-4]，正交试验因素水平见表1。
2.2 正交试验提取物测定方法
提取液经浓缩后喷雾干燥，称取粉末重量。
标准溶液配置，精密称定1.0mg 6-姜酚和0.2mg丹参ⅡA对照品，加甲醇溶解定容至10mL容量瓶中。以十八烷基键合硅胶为填充剂（4.6mm×150mm，5μm），甲醇-0.02 % 磷酸溶液（75∶25）为流动相；检测波长为270nm，流速为1.0mL/min，柱温25℃，进样体积10μL，理论板数按丹参ⅡA 峰计算不应低于4000，理论板数按6-姜酚峰计算不应低于5000。
准确称定取1.0mL试样溶于甲醇后定溶至10mL，取1mL稀释后样品转移至离心管中，2000r/min离心2min，取上清用0.45μm微膜过滤后转移至样品瓶中。按上述色谱条件进样10μL，外标一点法测定样品中6-姜酚和丹參酮ⅡA含量。
2.3 验证实验
为确定该工艺的优劣和稳定性，据所筛选的工艺条件，进行了3批验证试验，称取干姜10.0g、丹参2.0g各3份。
3 实验结果
根据L9（34）试验分别对提取物粉末重量、6-姜酚含量和丹参酮ⅡA含量进行测定，结果见表2，数据处理结果见表3。
由表3可知，影响干姜和丹参提取物粉末量主要因素C>D>A>B，最佳提取条件为A3B3C3D3即液料比1∶16，提取75min，提取液浓度在80%，提取三次。影响干姜6-姜酚提取率的主要因素D>A>B>C，最佳提取条件为A1B3C3D3即液料比1∶8，提取75min，提取液浓度在80%，提取三次。影响丹参酮ⅡA提取率的主要因素D>A>B>C，最佳提取条件为A3B3C3D3即液料比1∶16，提取75min，提取液浓度在80%，提取3次。根据提取物重量、6-姜酚提取率和丹参酮ⅡA提取率得出最佳提取条件为液料比1∶16，提取75min，提取液浓度在80%，提取三次。验证试验结果见表4，结果表明本实验优化的提取方法稳定、可行。
4 讨论
在2015版《中国药典》中干姜和丹参的色谱测定条件不同，经过查阅文献和预实验，确定了C18柱（4.6mm×150mm，5μm），以甲醇- 0.02 % 磷酸溶液（75∶5）为流动相；流速为1.0mL/min，柱温25℃，检测波长为270nm，进样体积为10μL的色谱条件。在该色谱条件下均能测定出较好的吸收峰，丹参酮ⅡA的最大吸收波长为270nm，6-姜酚在270nm～280nm均有较大吸收，经过实验验证检测波长确定为270nm。本实验提取干姜和当归两味性均偏温，活血化瘀，温通经脉中药主要有效成分，为中药保健品加工提供参考。
参考文献
[1]项佳媚，许利嘉，肖伟，肖培根.姜的研究进展[J].中国药学杂志，2017，52（05）：353-357.
[2]宋立群.丹参药理作用研究进展[J].社区医学杂志，2012，10（24）：51-53.
[3]邓仙梅，吴燕妮，王淑美，梁生旺，孟江.正交试验优选干姜中姜辣素的提取工艺[J].中医学报，2015，30（01）：83-85.
[4]张永鑫，李俊松，陈丽华，彭稳稳，蔡宝昌.高效液相色谱法同时测定姜及其不同炮制品中5种姜辣素的含量[J].中国药学杂志，2012，47（06）：471-474.
[5]李绍林，张建军.丹参提取工艺优选[J].中国实验方剂学杂志，2011，17（12）：45-47.
关键词：干姜；丹参； 6-姜酚；丹参酮ⅡA
中图分类号： R284 文献标识码： A DOI编号： 10.14025/j.cnki.jlny.2018.02.017
干姜（Rhizoma Zingiberis.）为姜科姜素植物的干燥根，主要含有干姜挥发油和姜辣素，具有温中助阳，对于体虚有寒的患者或者冬季四肢冷感较甚的人群有很好的作用[1]。丹参（Salviae Miltiorrhiza Bge.）属唇形科植物，它的干燥根和茎主要含有丹参酮，有活血祛瘀，通经止痛，清心除烦，凉血消痈，胸痹心痛，脘腹胁痛的功效[2]。干姜和丹参均味性偏温，辛散，合用可起到活血化瘀、补虚、温通经脉的作用。提取干姜和丹参有效成分制备成便于携带的剂型，可减少传统中药泡脚中药液熬制过程，方便中药足浴；制备成剂型后中药足浴产品与直接用中药材足浴相比，成品体积小易于携带，使用方便，保质期更长。
1 实验仪器试剂
干姜、丹参饮片（四川利民中药饮片有限公司）；乙醇（天津市永达化学试剂有限公司）安捷伦1200高效液相色谱色谱仪，C18柱（4.6mm×150mm，5μm）。
2 实验方法
2.1 中药有效成分的提取
按干姜：丹参（5∶1）的比例分别称取干姜10.0g、丹参2.0g。加热回流法提取，以提取物粉末量、提取液中6-姜酚和丹参酮ⅡA浓度分别指标，L9（34）正交试验考察液料比、乙醇浓度和提取时间对提取效果的影响，优化提取工艺[3-4]，正交试验因素水平见表1。
2.2 正交试验提取物测定方法
提取液经浓缩后喷雾干燥，称取粉末重量。
标准溶液配置，精密称定1.0mg 6-姜酚和0.2mg丹参ⅡA对照品，加甲醇溶解定容至10mL容量瓶中。以十八烷基键合硅胶为填充剂（4.6mm×150mm，5μm），甲醇-0.02 % 磷酸溶液（75∶25）为流动相；检测波长为270nm，流速为1.0mL/min，柱温25℃，进样体积10μL，理论板数按丹参ⅡA 峰计算不应低于4000，理论板数按6-姜酚峰计算不应低于5000。
准确称定取1.0mL试样溶于甲醇后定溶至10mL，取1mL稀释后样品转移至离心管中，2000r/min离心2min，取上清用0.45μm微膜过滤后转移至样品瓶中。按上述色谱条件进样10μL，外标一点法测定样品中6-姜酚和丹參酮ⅡA含量。
2.3 验证实验
为确定该工艺的优劣和稳定性，据所筛选的工艺条件，进行了3批验证试验，称取干姜10.0g、丹参2.0g各3份。
3 实验结果
根据L9（34）试验分别对提取物粉末重量、6-姜酚含量和丹参酮ⅡA含量进行测定，结果见表2，数据处理结果见表3。
由表3可知，影响干姜和丹参提取物粉末量主要因素C>D>A>B，最佳提取条件为A3B3C3D3即液料比1∶16，提取75min，提取液浓度在80%，提取三次。影响干姜6-姜酚提取率的主要因素D>A>B>C，最佳提取条件为A1B3C3D3即液料比1∶8，提取75min，提取液浓度在80%，提取三次。影响丹参酮ⅡA提取率的主要因素D>A>B>C，最佳提取条件为A3B3C3D3即液料比1∶16，提取75min，提取液浓度在80%，提取3次。根据提取物重量、6-姜酚提取率和丹参酮ⅡA提取率得出最佳提取条件为液料比1∶16，提取75min，提取液浓度在80%，提取三次。验证试验结果见表4，结果表明本实验优化的提取方法稳定、可行。
4 讨论
在2015版《中国药典》中干姜和丹参的色谱测定条件不同，经过查阅文献和预实验，确定了C18柱（4.6mm×150mm，5μm），以甲醇- 0.02 % 磷酸溶液（75∶5）为流动相；流速为1.0mL/min，柱温25℃，检测波长为270nm，进样体积为10μL的色谱条件。在该色谱条件下均能测定出较好的吸收峰，丹参酮ⅡA的最大吸收波长为270nm，6-姜酚在270nm～280nm均有较大吸收，经过实验验证检测波长确定为270nm。本实验提取干姜和当归两味性均偏温，活血化瘀，温通经脉中药主要有效成分，为中药保健品加工提供参考。
参考文献
[1]项佳媚，许利嘉，肖伟，肖培根.姜的研究进展[J].中国药学杂志，2017，52（05）：353-357.
[2]宋立群.丹参药理作用研究进展[J].社区医学杂志，2012，10（24）：51-53.
[3]邓仙梅，吴燕妮，王淑美，梁生旺，孟江.正交试验优选干姜中姜辣素的提取工艺[J].中医学报，2015，30（01）：83-85.
[4]张永鑫，李俊松，陈丽华，彭稳稳，蔡宝昌.高效液相色谱法同时测定姜及其不同炮制品中5种姜辣素的含量[J].中国药学杂志，2012，47（06）：471-474.
[5]李绍林，张建军.丹参提取工艺优选[J].中国实验方剂学杂志，2011，17（12）：45-47.