【摘 要】
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目的:建立NLRP3炎性体缺损的小鼠巨噬细胞模型。方法:构建靶向NLRP3基因的带GFP和Neo标记的shRNA表达载体,转染小鼠巨噬细胞RAW264.7后用G418抗性标记筛选稳定转染的细胞克隆
【机 构】
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北京中医药大学生命科学学院免疫学与微生物学系
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(81573723);北京中医药大学基本科研业务费项目(2016-JYB-JSMS-004)
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目的:建立NLRP3炎性体缺损的小鼠巨噬细胞模型。方法:构建靶向NLRP3基因的带GFP和Neo标记的shRNA表达载体,转染小鼠巨噬细胞RAW264.7后用G418抗性标记筛选稳定转染的细胞克隆,并利用GFP标记通过流式细胞仪进一步纯化,得到的细胞命名为RAWNKD。利用定量PCR检测RAWNKD细胞及其在LPS和ATP联合刺激下NLRP3基因的稳定抑制效果。结果:RAWNKD细胞GFP标记的阳性率在80%以上,NLRP3基因的抑制率超过90%,即使用LPS和ATP联合刺激NLRP3基因mRNA增加也不
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