【摘 要】
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目的 研制肺炎球菌荚膜多糖(PS)与肺炎球菌溶血素(蛋白)偶联结合疫苗.方法 用PCR扩增肺炎球菌溶血素(Pn)基因,将其克隆入表达载体pET-28a质粒中,然后转化大肠杆菌JM109(DE3)
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目的 研制肺炎球菌荚膜多糖(PS)与肺炎球菌溶血素(蛋白)偶联结合疫苗.方法 用PCR扩增肺炎球菌溶血素(Pn)基因,将其克隆入表达载体pET-28a质粒中,然后转化大肠杆菌JM109(DE3)宿主细胞,并以IPTG诱导进行蛋白质表达,对所得蛋白质用固相Ni-NTA树脂作纯化,再用SDS-PAGE鉴定表达的纯化蛋白(rPn).以福尔马林脱毒rPn,去除其溶血活性,然后用氨基还原法将脱毒的rPn与PS(19F血清型)偶联结合,加入铝佐剂制备成疫苗.以该疫苗腹腔注射接种小鼠,用ELISA法检测小鼠血清中抗PS及抗Pn的体水平.结果 成功扩增和克隆了Pn基因,经诱导表达得到rPn蛋白,纯化后纯度达90%以上.PS与Pn结合物经凝胶层析柱分离,其洗脱峰较PS与Pn二峰明显前移.用该结合疫苗免疫的小鼠血清中抗PS(19F)抗体及抗Pn抗体的效价均明显高于阴性对照组(P＜0.01).结论 用基因工程技术制备的肺炎球菌溶血素作为蛋白载体,脱毒后与肺炎球菌多糖偶联而成的结合疫苗能在小鼠体内诱导出明显的免疫应答反应.
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