【摘 要】
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作者以pBR322为载体,成功地构建了人巨细胞病毒(HCMV)B基因克隆,并用微机处理系统分析了B基因核苷酸序列的限制性位点。用BamHI酶解重组抽粒PAT153,电泳分离8.5kb片段,与经Ba
【机 构】
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华西医大医学院儿科学教研室,华西医大医学院儿科学教研室,华西医大基础医学院生物化学教研室 博士研究生
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作者以pBR322为载体,成功地构建了人巨细胞病毒(HCMV)B基因克隆,并用微机处理系统分析了B基因核苷酸序列的限制性位点。用BamHI酶解重组抽粒PAT153,电泳分离8.5kb片段,与经BamHI酶解、小牛肠碱性磷酸酶处理后的载体pBR322连接形成重组质粒pB_1。然后再用BamHI和HindⅢ双酶酶解pB_1,电泳分离5.1kb片段,与经双酶酶解后的载体pBR322连接构成HCMV B基因的pBH_1次级克隆。B基因核苷酸序列中存在13种限制性内切酶位点,片段大小在22bp至2.9kb之间。
Using pBR322 as a vector, we successfully constructed the human cytomegalovirus (HCMV) B gene clone and analyzed the restriction site of the nucleotide sequence of B gene by computer processing system. The recombinant plasmid pB_1 was digested with BamHI, and the 8.5kb fragment was separated by electrophoresis. The recombinant plasmid pB_1 was constructed by digestion with BamHI and calf intestinal mucosal alkaline phosphatase (pBR322). Then, pB_1 was digested with BamHI and Hind Ⅲ double enzymes, and the 5.1kb fragment was separated by electrophoresis. The pBH_1 subclone of HCMV B gene was constructed by ligating pBR322 with pBR322. There are 13 restriction enzyme sites in the nucleotide sequence of B gene, and the fragment sizes range from 22 bp to 2.9 kb.
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