乳腺丝氨酸蛋白酶抑制剂基因在胶质瘤细胞株U87、U251中表达沉默的表观遗传学机制

来源 :中华实验外科杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:peterwei2009
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目的 探讨乳腺丝氨酸蛋白酶抑制剂基因(maspin)在人胶质瘤细胞株U87、U251中沉默与表观遗传学关系.方法 运用逆转录-聚合酶链反应( RT-PCR)、Western blot检测maspin基因在U87、U251的表达.甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)测定maspin基因启动子区区域甲基化状态.同时运用亚硫酸氢盐测序法(BSP)检测maspin基因启动子区甲基化CpG位点.RT-PCR检测12 μmol/L 5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-DC)和/或500 nmol/L曲古霉素(TSA)、15 μmol/L 5-Aza-DC/或500 nmol/L TSA分别处理U87、U251后,maspin基因mRNA表达水平.结果 在胶质瘤细胞株U87、U251中maspin基因表达沉默.maspin基因启动子CpG位点处于甲基化状态.RT-PCR结果显示,未处理组、5-Aza-DC、TSA、5-Aza-DC和TSA分别处理U87后,maspin mRNA相对表达量分别为:0.001 2±0.000 1 、0.0303 ±0.0006、0.019 6±0.001 6、0.052 6 ±0.003 4;未处理组和5-Aza-DC、TSA、5-Aza-DC和TSA分别处理U251后,maspin mRNA相对表达量分别为:0.002 2±0.0030、0.0122±0.0008、0.0249±0.0012、0.038 4±0.003 1.表明5-Aza-DC和/或TSA能恢复U87、U251中maspin基因表达(P<0.01).结论 maspin在胶质瘤中的表达抑制与其启动子CpG岛甲基化及组蛋白去乙酰化相关,5-Aza-DC和/或TSA能恢复maspin在胶质瘤细株U87、U251中的转录。

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