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摘要[目的]建立紫外-分光光度法测定黄连不同炮制品中总生物碱含量的方法。[方法]采用60%乙醇加入10倍量，加热回流提取1 h，提取3次；使用U-3010型紫外-可见分光光度计；测定波长为345 nm。[结果]总生物碱在不同黄连炮制品中含量不同。[结论]该方法操作简单、重现性好、所测结果稳定，可用于黄连药材及不同炮制品的质量控制。
关键词紫外-分光光度法；黄连；炮制品；总生物碱；含量
中图分类号S567.5+2文献标识码
A文章编号0517-6611（2015）10-087-02
黄连是临床广为使用的一味中药，其为毛茛科植物黄连、三角叶黄连或云连的干燥根茎，其味苦、性寒，归心、脾、大肠经，具有清热燥湿、泻火解毒等功用。近年来，黄连炮制品种类较多，地理分布也较广泛，因此其药材质量不易控制。该试验采用紫外-分光光度法，对黄连及炮制品药材中的总生物碱含量进行测定[1]，对其质量监控具有重要意义。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1仪器。紫外-可见分光光度计（安捷伦U-3010型），HH-4数显恒温水浴锅（天津汇科仪器设备有限公司），AS3120A超声波清洗器（杭州汇尔仪器有限公司），AR2140电子分析天平（上海力衡仪器仪表有限公司）。
1.1.2试药。黄连药材均由四川购进，小檗碱对照品由成都普思生物科技有限公司提供，甲醇、乙醇等均为分析醇。
1.1.3炮制品制备。黄连炮制品均由黄连药材，参照《中药炮制学》[2]、《中华人民共和国药典》[3]、《中药炮制学辞典》[4]进行制备。
1.2方法
1.2.1对照品溶液的制备。精密称取盐酸小檗碱对照品4.001 mg，将其置于25 ml容量瓶，加入适量甲醇盐酸溶液（100∶1）[5]，待溶解后稀释至刻度，摇匀，配制成浓度为0.160 1 mg/ml备用；精密吸取浓度为0.160 1 mg/ml的盐酸小檗碱对照品溶液1.05 ml至25 ml的容量瓶中，向其加入0.05 mol/L 的H2SO4溶液定容[6]，制得对照品溶液，其浓度为0.006 73 mg/ml。
1.2.2供试品溶液的制备。精密称取黄连及炮制品药材，约3.0 g，置圆底烧瓶中。加入10倍量60%乙醇，加热连续回流提取3次，每次1 h。滤过，合并，定容至100 ml容量瓶中，精密移取0.20 ml用0.05 mol/L的硫酸水溶液定容至100 ml容量瓶，作为供试品溶液。
1.2.3检测波长的确定。取0.05 mol/L硫酸溶液为空白溶液，置1 cm吸收池中，再取适量盐酸小檗碱对照品（0.006 73 mg/ml）加入到吸收池中，在200～500 nm波长区间内扫描；另取黄连药材供试品溶液，置1 cm吸收池中，在200～500 nm波长扫描，发现对照品及黄连药材供试品最大吸收在345 nm处，且易于测定，杂质峰干扰较少（图1）。最终确定345 nm作为检测波长。
1.2.4方法学考察。
1.2.4.1线性关系的考察。精密移取小檗碱对照品0.5、0.7、1.3、1.5、2.0 ml，用硫酸溶液（0.05 mol/L）定容至25 ml容量瓶。按照“1.2.3”项下方法进行吸光度测定。以对照品溶液取样量为横坐标、吸光度为纵坐标绘制标准曲线。
1.2.4.2精密度试验。取同一黄连生品药材的供试品溶液，分别精密移取5份，测定其吸光度，并计算峰面积的RSD值。
1.2.4.3稳定性试验。取同一黄连生品药材的供试品溶液置室温下，分别在0、3、6、9、12、24 h进行测定，计算峰面积的RSD值。
1.2.4.4重复性试验。精密称取黄连药材5份，每份3.0 g，按“1.2.2”项下方法制备黄连药材的供试品溶液，计算峰面积的RSD组。
1.2.4.5加样回收率试验。取已知含量的黄连药材5份，每份1.0 g。分别加入小檗碱对照品132.49 mg（所含总生物碱的含量与1 g黄连药材所含总生物碱量相同）。按“1.2.2”项方法制备黄连生品药材供试品溶液，测定回收率。
1.2.5黄连生品及炮制品中总生物碱的测定。取黄连药材及炮制品药材各约3.0 g，精密称定，按“1.2.2”项下方法分别制备供试品溶液，按“1.2.3”项下方法对黄连药材及炮制品药材进行测定。
2结果与分析
2.1方法学考察
2.1.1线性关系考察。在345 nm检测波长下，绘制标准曲线（图2），确定回归方程为Y=2.818 7X+0.018 1，R2=0.999 7，表明样品在0.080 05～0.330 22 mg线性关系良好。
2.1.2精密度试验。按“1.2.4.2”方法操作，计算峰面积的RSD=0.91%，表明该试验精密度较好。
2.1.3稳定性试验。按“1.2.4.3”方法操作，计算峰面积的RSD=1.89%，表明供试品具有较好的稳定性。
2.1.4 重复性试验。按“1.2.4.4”方法操作，计算峰面积的RSD=1.60%，表明该试验的重复性良好。
2.1.5加样回收率试验。由表1可见，黄连生品药材供试品溶液的平均回收率为97.98%，RSD为1.00%，表明该方法回收率较好，具有可行性。
2.2黄连生品及炮制品中总生物碱的测定从表2可以直观看出8种炮制品总生物碱含量有所不同，酒制黄连总生物碱的含量最高（137.3 mg/g），碳制黄连总生物碱的含量最低（108.6 mg/g），其余黄连炮制品中总生物碱含量相差不大。结果表明，炮制方法不同，生物碱的溶出率有所改变。
3讨论
目前的文献报道多是研究黄连生品药材的质量控制，对于其相关炮制品研究的文献报道较少，且对于炮制品的研究
种类并不全面。该试验研究的黄连炮制品种类较为广泛，采
用8种炮制方法进行炮制，可以全面了解不同炮制品与生品间有效成分的含量变化关系，为临床用药提供有利依据。
此外，该试验还对黄连中总生物碱的提取工艺进行了考察。通过考察乙醇、水、水（含1%HCL）和甲醇等提取溶剂，确定乙醇为最佳提取溶剂；通过考察超声提取、加热回流提取、索氏提取等提取方式，确定加热回流提取效率最高；分析正交设计试验结果，选取10倍量60%乙醇，加热回流提取60 min，共提取3次为最好提取工艺。
参考文献
[1]
黄小平，张毅，钟国跃.不同产地和生长年限黄连的总生物碱含量测定[J].现代中药研究与实践，2003，11（11）：42.
[2] 叶定江，张世臣，潘三红.中药炮制学[M].北京：中国中医药出版社，1999：216.
[3] 国家药典委员会.中华人民共和国药典.一部[S].北京：化学工业出版社，2005：141.
[4] 叶定江，原思通.中药炮制学辞典[M].上海：上海科学技术出版社，2005：6.
[5] 吴春红，谢颖.RP-HPLC法测定黄连中小檗碱含量[J].华西医学，2006，21（3）：467.
[6] 徐晓宏，张铁军，廖茂梁，等.打孔吸附树脂分离纯化黄连总生物碱的工艺研究[J].中草药，2007，4（8）：1167.
关键词紫外-分光光度法；黄连；炮制品；总生物碱；含量
中图分类号S567.5+2文献标识码
A文章编号0517-6611（2015）10-087-02
黄连是临床广为使用的一味中药，其为毛茛科植物黄连、三角叶黄连或云连的干燥根茎，其味苦、性寒，归心、脾、大肠经，具有清热燥湿、泻火解毒等功用。近年来，黄连炮制品种类较多，地理分布也较广泛，因此其药材质量不易控制。该试验采用紫外-分光光度法，对黄连及炮制品药材中的总生物碱含量进行测定[1]，对其质量监控具有重要意义。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1仪器。紫外-可见分光光度计（安捷伦U-3010型），HH-4数显恒温水浴锅（天津汇科仪器设备有限公司），AS3120A超声波清洗器（杭州汇尔仪器有限公司），AR2140电子分析天平（上海力衡仪器仪表有限公司）。
1.1.2试药。黄连药材均由四川购进，小檗碱对照品由成都普思生物科技有限公司提供，甲醇、乙醇等均为分析醇。
1.1.3炮制品制备。黄连炮制品均由黄连药材，参照《中药炮制学》[2]、《中华人民共和国药典》[3]、《中药炮制学辞典》[4]进行制备。
1.2方法
1.2.1对照品溶液的制备。精密称取盐酸小檗碱对照品4.001 mg，将其置于25 ml容量瓶，加入适量甲醇盐酸溶液（100∶1）[5]，待溶解后稀释至刻度，摇匀，配制成浓度为0.160 1 mg/ml备用；精密吸取浓度为0.160 1 mg/ml的盐酸小檗碱对照品溶液1.05 ml至25 ml的容量瓶中，向其加入0.05 mol/L 的H2SO4溶液定容[6]，制得对照品溶液，其浓度为0.006 73 mg/ml。
1.2.2供试品溶液的制备。精密称取黄连及炮制品药材，约3.0 g，置圆底烧瓶中。加入10倍量60%乙醇，加热连续回流提取3次，每次1 h。滤过，合并，定容至100 ml容量瓶中，精密移取0.20 ml用0.05 mol/L的硫酸水溶液定容至100 ml容量瓶，作为供试品溶液。
1.2.3检测波长的确定。取0.05 mol/L硫酸溶液为空白溶液，置1 cm吸收池中，再取适量盐酸小檗碱对照品（0.006 73 mg/ml）加入到吸收池中，在200～500 nm波长区间内扫描；另取黄连药材供试品溶液，置1 cm吸收池中，在200～500 nm波长扫描，发现对照品及黄连药材供试品最大吸收在345 nm处，且易于测定，杂质峰干扰较少（图1）。最终确定345 nm作为检测波长。
1.2.4方法学考察。
1.2.4.1线性关系的考察。精密移取小檗碱对照品0.5、0.7、1.3、1.5、2.0 ml，用硫酸溶液（0.05 mol/L）定容至25 ml容量瓶。按照“1.2.3”项下方法进行吸光度测定。以对照品溶液取样量为横坐标、吸光度为纵坐标绘制标准曲线。
1.2.4.2精密度试验。取同一黄连生品药材的供试品溶液，分别精密移取5份，测定其吸光度，并计算峰面积的RSD值。
1.2.4.3稳定性试验。取同一黄连生品药材的供试品溶液置室温下，分别在0、3、6、9、12、24 h进行测定，计算峰面积的RSD值。
1.2.4.4重复性试验。精密称取黄连药材5份，每份3.0 g，按“1.2.2”项下方法制备黄连药材的供试品溶液，计算峰面积的RSD组。
1.2.4.5加样回收率试验。取已知含量的黄连药材5份，每份1.0 g。分别加入小檗碱对照品132.49 mg（所含总生物碱的含量与1 g黄连药材所含总生物碱量相同）。按“1.2.2”项方法制备黄连生品药材供试品溶液，测定回收率。
1.2.5黄连生品及炮制品中总生物碱的测定。取黄连药材及炮制品药材各约3.0 g，精密称定，按“1.2.2”项下方法分别制备供试品溶液，按“1.2.3”项下方法对黄连药材及炮制品药材进行测定。
2结果与分析
2.1方法学考察
2.1.1线性关系考察。在345 nm检测波长下，绘制标准曲线（图2），确定回归方程为Y=2.818 7X+0.018 1，R2=0.999 7，表明样品在0.080 05～0.330 22 mg线性关系良好。
2.1.2精密度试验。按“1.2.4.2”方法操作，计算峰面积的RSD=0.91%，表明该试验精密度较好。
2.1.3稳定性试验。按“1.2.4.3”方法操作，计算峰面积的RSD=1.89%，表明供试品具有较好的稳定性。
2.1.4 重复性试验。按“1.2.4.4”方法操作，计算峰面积的RSD=1.60%，表明该试验的重复性良好。
2.1.5加样回收率试验。由表1可见，黄连生品药材供试品溶液的平均回收率为97.98%，RSD为1.00%，表明该方法回收率较好，具有可行性。
2.2黄连生品及炮制品中总生物碱的测定从表2可以直观看出8种炮制品总生物碱含量有所不同，酒制黄连总生物碱的含量最高（137.3 mg/g），碳制黄连总生物碱的含量最低（108.6 mg/g），其余黄连炮制品中总生物碱含量相差不大。结果表明，炮制方法不同，生物碱的溶出率有所改变。
3讨论
目前的文献报道多是研究黄连生品药材的质量控制，对于其相关炮制品研究的文献报道较少，且对于炮制品的研究
种类并不全面。该试验研究的黄连炮制品种类较为广泛，采
用8种炮制方法进行炮制，可以全面了解不同炮制品与生品间有效成分的含量变化关系，为临床用药提供有利依据。
此外，该试验还对黄连中总生物碱的提取工艺进行了考察。通过考察乙醇、水、水（含1%HCL）和甲醇等提取溶剂，确定乙醇为最佳提取溶剂；通过考察超声提取、加热回流提取、索氏提取等提取方式，确定加热回流提取效率最高；分析正交设计试验结果，选取10倍量60%乙醇，加热回流提取60 min，共提取3次为最好提取工艺。
参考文献
[1]
黄小平，张毅，钟国跃.不同产地和生长年限黄连的总生物碱含量测定[J].现代中药研究与实践，2003，11（11）：42.
[2] 叶定江，张世臣，潘三红.中药炮制学[M].北京：中国中医药出版社，1999：216.
[3] 国家药典委员会.中华人民共和国药典.一部[S].北京：化学工业出版社，2005：141.
[4] 叶定江，原思通.中药炮制学辞典[M].上海：上海科学技术出版社，2005：6.
[5] 吴春红，谢颖.RP-HPLC法测定黄连中小檗碱含量[J].华西医学，2006，21（3）：467.
[6] 徐晓宏，张铁军，廖茂梁，等.打孔吸附树脂分离纯化黄连总生物碱的工艺研究[J].中草药，2007，4（8）：1167.