论文部分内容阅读
目的克隆布氏锥虫亮氨酸-tRNA合成酶基因，并进行表达纯化及活性测定。方法通过PCR方法从布氏锥虫细胞基因组中扩增出亮氨酰．tRNA合成酶（LeuRS）基因，依次克隆入pBS-T克隆载体及pET21a（＋）表达载体，在大肠杆菌B1221（DE3）RIPL中通过条件优化后表达。表达产物用His-Bind亲和色谱纯化，并用免疫印迹进行鉴定。采用放射性同位素方法进行酶活性测定。结果PCR扩增得到3．2kb的DNA片段，重组质粒pET21a（＋）／LeuRS经酶切鉴定和测序分析，表明构建正确。表达的重组蛋白占菌体