大麦萌发种子总mRNA的分离及cDNA克隆

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以大麦为材料,用硫氰酸胍-热酚-氯化锂-蛋白酶K法抽提萌发种子的总RNA,经过Oligo(dT)-纤维素柱层析,分离出总mRNA。经MuMLV逆转录酶合成cDNA第一条链,再用E. coliDNA聚合酶Ⅰ-RNase H共同作用,合成第二条链。经DNA聚合酶Ⅰ大片段修平末端后,与经过SmaⅠ完全酶切并用碱性磷酸酶处理了的pUC19载体连接,转化受体菌JM107,挑出白色重组子,用小麦全长的α-淀粉酶基因为探针经过菌落原位杂交筛选,获得一个含有α-淀粉酶基因片段的阳性克隆,插入片段长度约0.8kb。
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