【摘 要】
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将Lipomycesstarkeyi CGMCC 2.1390菌株的DEX基因进行PCR扩增并克隆至表达载体pPICZαA上,将重组质粒转化至Pichia pastoris X33细胞中进行甲醇诱导分泌表达。质粒转化至Pich
【机 构】
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吴江近岸蛋白质科技有限公司; 复旦大学生命科学学院;
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将Lipomycesstarkeyi CGMCC 2.1390菌株的DEX基因进行PCR扩增并克隆至表达载体pPICZαA上,将重组质粒转化至Pichia pastoris X33细胞中进行甲醇诱导分泌表达。质粒转化至Pichia pastoris X33细胞中,经1%甲醇诱导72h表达重组蛋白,培养基上清中DEX浓度和酶活力分别为14.3mg/L、25648U/L。重组蛋白经过两步层析纯化后,纯度为90%,酶活力回收率为58.4%,比活力为7130U/mg。重组DEX最适反应温度为35℃,最适反应p H值为5.0,酶在低于40℃、p H3.0～8.0稳定。以右旋糖酐20k Da为底物,酶的Km值为6.2×10-4mol/L,Vmax值为4.0×10-3mol/min·L;以右旋糖酐70kDa为底物,酶的Km=7.4×10-5mol/L,Vmax=3.0×10-3mol/min·L。Zn2+对酶活力有微弱促进作用,Ca2+对酶活力有轻微抑制。10%Sucrose有利于提高重组DEX的保存稳定性。
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