【摘 要】
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目的探讨microRNA-27a-3p(miR-27a-3p)对肺成纤维细胞I型胶原(ColⅠ)和III型胶原(ColⅢ)合成的影响及分子机制。方法培养人胚肺成纤维细胞MRC-5,转染miR-27a-3p模拟物/抑制物
【机 构】
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湖南医药学院医学院; 湖南环境生物职业技术学院医学院; 怀化市第一人民医院呼吸内科;
【基金项目】
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怀化市科技计划资助项目(No 2017G3305);湖南省教育厅优秀青年科研资助项目(No 14B142)
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目的探讨microRNA-27a-3p(miR-27a-3p)对肺成纤维细胞I型胶原(ColⅠ)和III型胶原(ColⅢ)合成的影响及分子机制。方法培养人胚肺成纤维细胞MRC-5,转染miR-27a-3p模拟物/抑制物,实时荧光定量PCR(qPCR)检测miR-27a-3p水平;qPCR和Western blot测定ColⅠ、ColⅢ、Wnt3a表达;Western blot分析细胞核内β-catenin水平。生物信息学预测miR-27a-3p与Wnt3a 3′-非翻译区(3′-UTR)靶向结合情况,并用双荧光素酶报告基因检测miR-27a-3p模拟物对Wnt3a 3′-UTR野生型和突变型荧光素酶活性的影响。给予Wnt3a/β-catenin信号通路抑制剂Dkk1预处理MRC-5细胞6 h,再用miR-27a-3p抑制物转染细胞48 h,qPCR和Western blot检测ColⅠ、ColⅢ表达。结果 miR-27a-3p模拟物明显增加miR-27a-3p水平,降低ColⅠ、ColⅢ、Wnt3a和β-catenin表达,其抑制物的作用则相反,与对照组比较,差异均有显著性(P<0.01)。Wnt3a 3′-UTR存在1个miR-27a-3p的结合位点,miR-27a-3p过表达减少野生型Wnt3a 3′-UTR荧光素酶活性(P<0.01),但对其突变型荧光素酶活性无影响(P>0.05)。Dkk1预处理几乎完全逆转miR-27a-3p抑制物对ColⅠ、ColⅢ合成的诱导作用(P<0.05)。结论 miR-27a-3p抑制肺成纤维细胞ColⅠ、ColⅢ生物合成,其机制与拮抗Wnt3a/β-catenin信号通路有关。
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