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目的
探讨NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体在富氢液减轻LPS致小鼠巨噬细胞线粒体损伤中的作用。
方法常规培养小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞，采用随机数字表法随机分为4组(n＝6)：对照组(C组)、LPS组、富氢液＋LPS组(LPS＋H2组)和富氢液＋LPS＋ATP组(LPS＋ATP＋H2组)。LPS组给予浓度为1 μg/ml的LPS孵育30 min。LPS＋H2组和LPS＋ATP＋H2组同时给予浓度为1 μg/ml的LPS和浓度为0.6 mmol/ L的富氢液孵育30 min，然后LPS＋ATP＋H2组给予浓度为1 nmol/L的ATP孵育6 h。采用JC-1法测定线粒体膜电位(MMP)，采用Clark氧电极法测定线粒体呼吸控制率(RCR)。采用Western blot法测定细胞NLRP3、caspase-1和凋亡相关点状蛋白(ASC)的表达。采用ELISA法检测上清液IL-1β、IL-18和IL-6的浓度。
结果与C组比较，LPS组MMP和RCR降低，上清液IL-1β、IL-18和IL-6浓度升高，细胞NLRP3、caspase-1和ASC表达上调(P<0.05)；与LPS比较，LPS＋H2组MMP和RCR升高，上清液IL-1β、IL-18和IL-6浓度降低，细胞NLRP3、caspase-1和ASC表达下调(P<0.05)；与LPS＋H2组比较，LPS＋ATP＋H2组MMP和RCR升高，上清液IL-1β、IL-18和IL-6浓度降低，细胞NLRP3、caspase-1和ASC表达下调(P<0.05)。
结论富氢液可通过抑制NLRP3炎症小体激活，减轻LPS致小鼠巨噬细胞线粒体损伤。