心房肌细胞移植修复重建窦房结功能的实验研究

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目的通过制备犬的病态窦房结(病窦)综合征模型,研究心房肌细胞移植修复重建窦房结功能,构建生物起博器的可行性。方法用射频消融(n=5)及化学消融(n=3)的方法制备犬的病窦综合征模型。采用酶法及差速贴壁法分离纯化新生犬的右心房细胞(包括窦房结),4,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)标记细胞核,移植前制备成单个心肌细胞悬液备用。在模型制备后4周,用微量注射器将1 ml细胞悬液多点注射至实验组的窦房结及其周围区域,对照组则单纯注射1 ml低糖培养液(L-DMEM)培养液,手术前后行电生理监测及组织学检查。结果消融窦房结后,出现了稳定的窦性心动过缓[(110±10)次/min]。细胞移植后第5天实验组体表心电图显示较前明显增快,为(150±12)次/min左右,电生理检测窦房结恢复时间(SNRT)、校正窦房结恢复时间(CSNRT)及窦房传导时间(SACT)均有明显缩短,微电极记录显示其自发性搏动频率快于对照组。而对照组自始至终无明显改变。HE染色及免疫荧光检测均显示移植细胞与宿主细胞间连接蛋白43(Cx43)及N-钙黏素(N-cadherin)的表达。结论心房肌细胞移植构建生物起搏器具有可行性,提供了生物介入治疗的新途径。

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