【摘 要】
：
为筛选鸡马立克氏病病毒(MDV)gI、gE基因特异性siRNA,本研究以鸡胚成纤维细胞(CEF)的DNA为模板,扩增禽源cU6-3启动子序列,并合成针对gI和gE基因各5个靶位点的10条shRNA序列.
【机 构】
：
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室,东北农业大学动物科技学院
【基金项目】
：
兽医生物技术国家重点实验室基本科研业务费项目;
论文部分内容阅读
为筛选鸡马立克氏病病毒(MDV)gI、gE基因特异性siRNA,本研究以鸡胚成纤维细胞(CEF)的DNA为模板,扩增禽源cU6-3启动子序列,并合成针对gI和gE基因各5个靶位点的10条shRNA序列.通过重叠PCR将cU6-3启动子与shRNA融合扩增制备shRNA表达盒,将制备的shRNA表达盒分别与重组质粒pEGFP-gI或pEGFP-gE共转染CEF细胞,并根据荧光显微镜观察和流式细胞仪检测结果评价siRNA抑制融合荧光蛋白表达的效率.结果表明,gI和gE基因的抑制效率为10%～80%.分别将其中抑制效率最高的一条shRNA插入pGEM-T载体中构建重组表达质粒pcU6-shgI735和pcU6-shgE936,通过不同细胞系稳定干扰试验和抑制病毒复制试验评价其干扰活性.结果显示,pcU6-shgI735和pcU6-shgE936能够明显抑制融合蛋白的表达及MDV在CEF细胞中的增殖,并且禽源U6启动子构建的表达盒在禽源细胞(DF1)中的活性比在哺乳动物细胞(Vero、MDCK)的活性高1.21～1.45倍.本研究鉴定获得了gI和gE基因的特异性siRNA,筛选出能够抑制MDV复制的靶位点,为MDV基因的功能和抗MDV病毒研究奠定了基础.
其他文献
采用水蒸气蒸馏法提取入侵杂草三裂叶蟛蜞菊地上部的挥发油,并用生长速率法测定挥发油对水稻稻瘟病菌、水稻纹枯病菌和玉米纹枯病菌生长的影响,采用气相色谱-质谱法(GC-MS)对
首先用不同的有机溶剂分部萃取苦丁茶(Ilex kudincha C.J.Tseng)热水提取物(粗提物),得到氯仿萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物及萃取剩余物,然后采用Folin-Ciocalteu比
目的:原核表达、纯化HIV-1型HXB2株蛋白酶(protease,PR),用于对HIV-1 Gag P2/NC蛋白酶切割位点序列随机突变的噬菌体展示文库的切割筛选及构建新的蛋白酶抑制剂(protease inh
植物MADS-box基因家族编码高度保守的转录因子,参与了包括花发育在内的多种发育进程.为阐释双子叶植物草原龙胆(Eustoma grandiflorum)花器官发育的分子调控机制,根据MADS-bo
目的 了解儿童意外损伤发生的原因及危险因素,为意外损伤的防预提供依据.方法 对2005年1月1日至2009年8月31日在复旦大学附属儿科医院住院的4 116例意外损伤患儿的临床资料进
从江苏某地正常屠宰猪扁桃体分离到1株细菌,命名为HA100111.该细菌呈链球菌的特征形态,药敏试验表明该菌株对多种抗生素有耐药性.经PCR及序列分析,确定该分离菌株为猪链球菌7
基于30省区CGE模型,模拟分析了碳排放许可的强度分配标准对我国区域协调发展的影响.结果表明:按行业属性设定强度分配标准会加剧区域经济发展不平衡状况;按区域经济发展水平
从玉米弯孢叶斑病菌中克隆到MAPK基因之一的Clm1,其与玉米小斑病菌中的ChMps1基因同源。采用InversePCR和RACE技术获得了该基因的全序列及其所在区域的旁侧序列。该基因cDNA
目的 探讨有骨片和无骨片的Ⅰ型锤状指手术疗效的差异.方法 2005年至2010年,收治46例Ⅰ型锤状指患者,其中A组22例,为伸肌腱止点处有撕脱骨折,术中采用克氏针固定远指间关节和
政策动态有关部门联合印发《万家企业节能低碳行动实施方案》。近日，发展改革委、教育部、工业和信息化部、财政部、住房城乡建设部、交通运输部等12个部门联合印发了《万家企