探讨同种异体骨髓间充质干细胞(BMSC)对LPS诱导的脓毒症大鼠腹腔巨噬细胞极化改变的影响。

(1)取5只SD大鼠，采用全骨髓贴壁法分离纯化培养BMSC，取第3代细胞行形态学观察，流式细胞仪检测干细胞表面标志物CD29、CD44、CD45、CD90的表达，并进行成骨细胞、成脂肪细胞诱导分化鉴定。(2)取45只SD大鼠，按随机数字表法分为假伤组5只、LPS对照组20只、BMSC治疗组20只。对LPS对照组、BMSC治疗组大鼠予尾静脉按5 mg/kg注射LPS致脓毒症，假伤组大鼠注射等量的生理盐水模拟致伤。伤后1 h，BMSC治疗组大鼠另予尾静脉注射1 mL BMSC(2×10⁶个/mL)，另2组大鼠注射等量PBS。假伤组大鼠于伤后24 h，LPS对照组、BMSC治疗组于伤后6、12、24、48 h各取5只大鼠处死后取肺组织行HE染色观察病理变化。假伤组伤后24 h的大鼠与LPS对照组、BMSC治疗组伤后24、48 h的大鼠另同时通过腹腔注射低糖DMEM培养液后取腹腔液培养巨噬细胞。流式细胞仪检测假伤组伤后24 h，LPS对照组、BMSC治疗组伤后24、48 h大鼠腹腔巨噬细胞标志物CD68(用于设门)、CD11c、CD206阳性表达情况。对数据行单因素方差分析、LSD检验。

(1)分离培养的第3代贴壁细胞形态呈均一纤维样，与Fb相似；CD29、CD44、CD90呈阳性表达，CD45呈弱阳性表达；诱导后细胞可分化为成骨细胞和成脂肪细胞，鉴定为BMSC。(2)伤后24 h，假伤组大鼠肺泡结构清晰、完整，无充血或炎性细胞浸润。伤后6 h，LPS对照组、BMSC治疗组大鼠肺泡结构清晰，少量炎性细胞浸润，肺组织轻微充血，肺间质稍增厚。伤后12 h，LPS对照组大鼠肺组织较BMSC治疗组炎症反应明显，可见大量炎性细胞浸润，肺组织充血，肺间质明显增厚；而BMSC治疗组大鼠与伤后6 h情况基本一致。伤后24 h，LPS对照组、BMSC治疗组大鼠肺组织病理改变较伤后12 h无明显变化。伤后48 h，LPS对照组大鼠肺泡组织结构仍严重破坏，大量炎性细胞浸润，肺组织充血，肺间质增厚情况较前稍有减轻；而BMSC治疗组大鼠基本恢复至假伤组水平。(3)伤后24 h，LPS对照组、BMSC治疗组大鼠腹腔巨噬细胞CD11c阳性表达率分别为(83±10)%和(87±7)%，二者相近(P>0.05)，且均明显高于假伤组的(55±12)%(P值均小于0.01)。LPS对照组伤后48 h大鼠腹腔巨噬细胞CD11c阳性表达率[(59±11)%]与假伤组伤后24 h相近(P>0.05)，且均高于BMSC治疗组伤后48 h的(20±11)%(P值均小于0.01)。伤后24 h，3组大鼠腹腔巨噬细胞CD206阳性表达比相近(P值均大于0.05)。假伤组伤后24 h和BMSC治疗组伤后48 h大鼠腹腔巨噬细胞CD206阳性表达比相近(P>0.05)，且均低于LPS对照组伤后48 h(P值均小于0.01)。

BMSC可减轻脓毒症大鼠肺组织的炎症反应，并且能够抑制腹腔巨噬细胞向Ⅰ型巨噬细胞极化，尚不能促使巨噬细胞向Ⅱ型巨噬细胞极化。