【摘 要】
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为了构建温敏核不育(TGMS)基因区域的精细物理图谱并最终分离TGMS基因,以温敏核不育水稻5460S为材料,摸索优化了构建植物细菌人工染色体(BAC)文库的方法,构建了一个高质量的B
【机 构】
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中国科学院遗传研究所,福建农业大学作物遗传育种研究所,Department of Soil and Crop Sciences
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为了构建温敏核不育(TGMS)基因区域的精细物理图谱并最终分离TGMS基因,以温敏核不育水稻5460S为材料,摸索优化了构建植物细菌人工染色体(BAC)文库的方法,构建了一个高质量的BAC文库. 该文库由19 584个克隆构成,插入片段平均长度为110 kb,相当于水稻单倍体基因组大小的5倍;以分子量分别为140和250 kb的2个大BAC克隆进行稳定性传代实验,经100代传代后其插入的DNA片段仍然稳定存在;以线粒体和叶绿体基因为探针筛选BAC文库,未检验出叶绿体和线粒体DNA的污染;以和tms1基因连锁的3个分子标记作为探针对BAC文库进行了筛选,每个探针至少可获得一个阳性克隆,利用热不对称性交错PCR(Tail-PCR)法成功分离了阳性克隆的左右末端序列.
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